国家自然科学基金(30371662)
- 作品数：3 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院军事医学科学院重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- KDR为靶的反义寡核苷酸、siRNA活性比较被引量：5
- 2005年
- 目的:观察反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,asONs),细胞内源性表达的短发卡状小干扰RNA(shorthairpinsmallinterferingRNA,siRNA)对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR:Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2/kinaseinsertdomain-containingreceptor)表达的抑制作用,探讨阻断DKR蛋白表达对MCF-7细胞增殖、生长的影响,并对两者作了比较。方法:设计了3条反义寡核苷酸,并根据其相应靶KDRmRNA杂交位点,构建了3条以质粒pPUR/U6为载体的可内源性表达短发卡状siRNA的pPUR/U6/KDR-siRNA。分别用Western-blotting方法检测了MCF-7细胞经反义寡核苷酸处理,pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染后对KDR蛋白表达的抑制作用;用MTT法观察了反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖的影响,并观察了pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染细胞的生长曲线。结果:3条反义寡核苷酸于0.8μmol/L时,均有效抑制了细胞KDR蛋白表达,抑制率分别为66.16%,50.21%,58.35%;3条反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖也显示了剂量依赖性下调作用。相应靶位点3条pPUR/U6/KDR-siRNA中,有2条在细胞稳定转染时显著下调了KDR蛋白表达,15天抑制率分别为75.21%,80.08%;30天时为59.29%,60.15%;细胞稳定转染表达siRNA后生长变慢。结论:可根据有效反义寡核苷酸靶位点设计siRNA。
- 郑素军林汝仙夏云黄爱龙钟森王升启任红
- 关键词：反义寡核苷酸SIRNA血管内皮生长因子受体2
- 血管内皮生长因子受体2为靶的反义寡核苷酸筛选及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用被引量：5
- 2006年
- 目的筛选出可与血管内皮生长因子受体2(KDR)mRNA高效、特异结合的反义寡核苷酸,探讨其体外抗肿瘤作用。方法先用寡核苷酸库杂交和计算机预测初筛反义寡核苷酸;经寡核苷酸芯片杂交验证,挑选与KDR mRNA有强杂交信号的反义寡核苷酸,用MTT法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)探讨反义寡核苷酸对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和KDR表达的抑制作用。结果在寡核苷酸库杂交筛选出的13条反义寡核苷酸中,有8条(8/13,61.5%)在芯片杂交中显示较强杂交信号;而在计算机预测设计的17条探针中,只有1条显示较强信号。合成杂交信号较强的9条硫代反义寡核苷酸,均能有效抑制MCF-7细胞增殖,并呈剂量依赖性。其中抑制率最高的2条反义寡核苷酸为asON4和asON7,由寡核苷酸库杂交联合芯片杂交筛出,在0.8μmol/L时抑制率分别为51.6%和62.2%;同时,这2条反义寡核苷酸在mRNA水平和蛋白质水平抑制了KDR基因表达,并呈剂量相关性。结论寡核苷酸库杂交筛选和寡核苷酸芯片杂交筛选的结果有较好一致性,将寡核苷酸库和寡核苷酸芯片联用是一种较好筛选反义寡核苷酸方法。KDR反义寡核苷酸有明显的抗肿瘤作用。
- 郑素军林汝仙夏云伯晓晨任红钟森王升启
- 关键词：反义寡核苷酸血管内皮生长因子受体2乳腺癌MCF-7细胞
- 端粒酶逆转录酶小干扰RNA对肝癌细胞的体外抑制作用被引量：13
- 2004年
- 目的 研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞SMMC-7721中抗肿瘤作用。 方法 针对hTERT基因编码区及非编码区,采用T7转录系统在体外合成了2条siRNA,转染SMMC-7721细胞。以四甲基偶氮唑盐试验、逆转录聚合酶链反应及western blot观察其对SMMC-7721细胞增殖、hTERT mRNA及蛋白表达的影响。 结果 2条siRNA以剂量依赖性方式抑制了SMMC-7721细胞增殖,当给药浓度为100nmol/L时,对hTERT mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用。 结论 靶向hTERT的siRNA对hTERT基因表达有抑制效果,有可能发展为一种新的抗肿瘤药物。
- 郑素军夏云任红钟森杨英陶鹏王升启
- 关键词：肝癌细胞小干扰RNA人端粒酶逆转录酶SMMC-7721细胞HTERT基因
