广州市科技支撑计划项目(2010J-E411)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：沈娟朱家勇金小宝丁静李小波更多>>
- 相关机构：广东药学院更多>>
- 发文基金：广州市科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 人源抗菌肽LL-37的原核表达及活性鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:实现大肠杆菌高效可溶表达人源抗菌肽LL-37。方法:LL-37基因克隆至原核载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。运用相关生物信息学软件分析重组蛋白Trx-LL-37的理化性质、亲/疏水性、蛋白质二级结构及其可溶表达概率。实验还考察了不同诱导温度对重组蛋白可溶表达比例的影响。结果:生物信息学分析显示,Trx-LL-37分子量21.5kD,理论等电点6.3,物理性质稳定,二级结构简单,具有可溶表达倾向。重组蛋白最佳诱导温度为17℃,与37℃相比,可溶表达比例由37.2%提高至50.2%,并且总表达量也提高了5%左右。抑菌结果显示纯化产物对多种常见细菌的生长具有抑制作用。结论:可采用融合方式通过原核系统高效可溶表达LL-37,为LL-37的功能研究打下基础。
- 丁静沈娟朱家勇金小宝卢雪梅梅寒芳李小波
- 关键词：生物信息学分析原核表达抑菌活性
- 烧烫伤创面感染的小鼠模型构建被引量：6
- 2013年
- 目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。
- 沈娟金小宝丁静朱家勇
- 关键词：烧烫伤金黄色葡萄球菌BALB
- 正交设计优化大肠杆菌表达LL-37-haFGF的摇瓶发酵条件被引量：3
- 2012年
- 目的在摇瓶发酵条件下,研究重组大肠杆菌诱导表达融合蛋白LL-37-haFGF的表达规律。方法以目的蛋白的相对表达量为评价指标,通过单因素分析和正交设计,从pH值、诱导时机、诱导时间、诱导剂浓度4个方面,对其发酵条件进行优化。结果影响LL-37-haFGF产生水平的主次因素顺序:诱导时机>pH值>诱导时间>诱导剂浓度。优化最佳工艺参数为:诱导时机为A600达0.6,pH值为7.5,IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L,诱导时间为4 h,LL-37-haFGF表达量达53.7%。结论该表达条件的优化为LL-37-haFGF的进一步功能研究和应用奠定基础。
- 沈娟丁静金小宝朱家勇
- 关键词：正交设计摇瓶发酵
- 非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子促小鼠烫伤愈合的研究被引量：6
- 2013年
- 目的:研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenic human acidic fibroblastgrowth factor,nmhaFGF)在促小鼠深II度烫伤创面愈合中的作用。方法:采用大肠杆菌系统表达纯化制备nmhaFGF,细胞增殖法检测nmhaFGF生物活性,构建Balb/C小鼠深II度烫伤创面模型,分为实验组(20μg nmhaFGF/cm2创面,用PBS释稀)和空白对照组(外涂PBS),观察烫伤后1,3,7,9,14 d创面面积变化,并统计创面完全愈合所需要的时间;伤后7d,21d,取各组的伤口及周边皮肤HE及免疫组化染色(PCNA,胶原蛋白),观察创面病理组织学改变,胶原排列情况。结果:获得纯度为95.1%的nmhaFGF,有丝分裂活性较haFGF大大降低,外用nmhaFGF可促小鼠烫伤愈合,将愈合时间由17.2 d缩短至15.8 d(P<0.01);伤后7 d,nmhaFGF组创面肉芽组织生长较好,PCNA表达与空白对照组相比显著增加;21 d创面再上皮化较快,胶原蛋白排列较为整齐。结论:局部用nmhaFGF能促进小鼠深II度烫伤创面愈合,明显缩短愈合时间。
- 沈娟金小宝丁静朱家勇
- 关键词：大肠杆菌烫伤愈合BALBC小鼠
- 融合蛋白LL-37-haFGF的复性及纯化条件研究被引量：1
- 2013年
- 首次设计开发一种促愈合,抗细菌感染的多肽分子——人源抗菌肽LL-37修饰haFGF的融合蛋白,旨在探讨此新型融合蛋白LL-37-haFGF的复性及纯化条件。利用重组大肠杆菌表达LL-37-haFGF并鉴定,初步考察8种复性添加小分子对其包涵体复性的作用,经分析表明,添加0.3 mol/L精氨酸可以大大提高LL-37-haFGF的复性效率。经镍亲和色谱及CM阳离子色谱纯化获得纯品。本研究获得了5.9 mg纯度为95.43%的LL-37-haFGF目的蛋白,为研究其功能奠定了基础,也为类似的双功能多肽的制备提供了参考依据。
- 沈娟金小宝丁静朱家勇
- 关键词：LL-37重组融合蛋白
