广州市科技计划项目(026G2434)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：姜泊杨晓强王继德孙勇张清华更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学解放军第305医院南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段的表达及纯化被引量：1
- 2007年
- 目的表达并纯化艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段,为制备高效防治艰难梭菌感染的疫苗和诊断抗原奠定基础。方法提取艰难梭菌染色体基因组DNA,用PCR扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体pET22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。诱导表达产物经金属螯合层析纯化,用SDS-PAGE进行分析。结果已成功地克隆了艰难梭菌细胞毒素B羧基末端重复区域的1848bp的基因,经双酶切、PCR和测序鉴定,插入到载体的基因与GenBank中公布的艰难梭菌VPI10463ToxinB3基因序列的同源性为99%。SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的相对分子质量为71300,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的14%,包涵体占沉淀的82·7%,纯化后可溶性蛋白浓度为0·781mg/ml。结论所构建的含艰难梭菌ToxinB3基因的pET22b(+)CDB3重组质粒能高效表达目的基因。金属螯合层析纯化重组蛋白CDB3的方法简便,特异性好。
- 刘红升姜泊张清华蒋知新
- 关键词：艰难梭菌功能区羧基末端
- 艰难梭菌毒素基因3’末端重复区域基因片段的PCR克隆被引量：3
- 2002年
- 目的探寻一种简单、快速、灵敏的检测艰难梭菌的方法。方法 以艰难梭菌毒素A和毒素B基因3’末端高度保守重复区分别设计一对引物,进行PCR反应,同时在同一体系相同反应条件下使用相同引物分别以大肠杆菌和乳杆菌DNA为模板进行扩增,比较二者结果。结果从艰难梭菌成功克隆了毒素A基因3’端重复区域960bp的基因片段及毒素B基因3’端重复区域1851bp的基因片段,不同来源的菌株出现了相同的2条电泳带,并通过测序鉴定;而对照的大肠杆菌和乳杆菌株无特异电泳带出现。结论从艰难梭菌毒素人毒素B基因3’末端重复区域克隆的基因片段具有保守性,可以作为基因探针在临床上进行艰难梭菌检测,该方法简便、灵敏,可直接用粪便标本进行检测。此外,这些基因编码的多肽具有较高的疏水性井存在着膜受体结合区域,可以此为基础进行基因工程蛋白质疫苗的研究。
- 杨晓强姜泊孙勇王继德
- 关键词：克隆艰难梭菌细菌毒素聚酶链反应
