国家自然科学基金(30371618)
- 作品数：2 被引量：24H指数：2
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- 相关机构：青岛大学烟台毓璜顶医院青岛大学医学院附属医院更多>>
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- EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒表达载体的构建及初步应用被引量：2
- 2007年
- 目的构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用。方法采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd- BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响。结果PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLF1基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功。经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLF1基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期。结论重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞。
- 孙淑红王云王笑峰孙坚萍朱伟罗兵
- 关键词：腺病毒载体EBV即刻早期基因
- EB病毒相关胃癌组织中病毒基因的表达被引量：22
- 2004年
- 背景与目的EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)与多种恶性肿瘤的发生有关,在鼻咽癌及淋巴瘤等组织中EBV的存在形式和表达已有报道,研究表明不同肿瘤组织中EBV的存在形式和表达不同,在胃癌组织中EBV某些基因尤其是裂解性基因的表达情况报道较少。为明确胃癌组织中EBV潜伏性基因和裂解性基因的表达情况,本研究从mRNA水平检测胃癌组织中EBV潜伏感染和裂解感染相关基因的表达,从分子水平探讨EBV编码基因与胃癌发生发展的关系。方法应用PCR-Southern杂交检测185例胃癌及其相应癌旁组织中特异性EBVDNA片段,进一步用原位杂交(ISH)技术检测PCR阳性标本EBV编码小RNA1(EBER1)的表达,癌细胞EBER1阳性者确定为EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)。采用RT-PCR和Southern杂交技术检测EBVaGCs组织中EBV核抗原(EBNAs)基因转录启动子(Qp、Cp和Wp)、潜伏性基因(EBNA1、EBNA2基因,潜伏膜蛋白LMP1、LMP2A和LMP2B基因)和裂解性基因(即刻早期基因BZLF1和BRLF1,早期基因BARF1和BHRF1,晚期基因BcLF1和BLLF1)的表达。结果185例胃癌标本EBV阳性率为7.03%(13/185),癌旁组织均为阴性。13例EBVaGCs组织中均检测到启动子QpmRNA,而Wp和CpmRNA则为阴性。潜伏性基因中EBNA1mRNA均阳性(13/13),而EBNA2。
- 王云罗兵赵鹏黄葆华
- 关键词：EB病毒胃肿瘤
