国家自然科学基金(40976101)
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
- 相关作者：周发林杨其彬江世贵黄建华邱丽华更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省海洋渔业科技推广专项项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 斑节对虾金属硫蛋白基因cDNA克隆与表达分析被引量：10
- 2011年
- 采用RACE-PCR方法从斑节对虾(Penaeus monodon)总RNA反转录产物中获得了502 bp的金属硫蛋白(Pm-MT)基因cDNA序列。该序列包含69 bp的5′非编码区(UTR)和256 bp的3′非编码区(UTR)以及177 bp的开放阅读框(ORF),可编码58个氨基酸。在其编码的氨基酸序列中半胱氨酸含量丰富,不含芳香族氨基酸,存在有无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列CKCXXXCXCX,预测的分子量约为6.05 kD,理论等电点7.75。序列比对分析表明Pm-MT与北美淡水蟹(Pacifastacus leniusculus)的相似性高达91.4%,与美国龙虾(Homarus americanus)的同源性最高为84.5%。实时定量PCR显示在所检测组织中,Pm-MT的mRNA在卵巢的表达量最高,其次为胃、肠、心脏、脑和肝胰腺;Pm-MT的mRNA在斑节对虾6个不同发育期的卵巢中的表达量都很高,其中在Ⅱ期卵巢中的表达量最高。实验所得结果以期为Pm-MT进一步在卵巢发育的功能研究提供基础材料。
- 郑丽明周发林杨其彬黄建华邱丽华苏天凤江世贵
- 关键词：斑节对虾金属硫蛋白克隆
- 斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析被引量：10
- 2014年
- 为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用,构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库,获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin)E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bp的cDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)为1 263 bp,编码420个氨基酸。生物信息学分析表明,该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)等多种节肢动物细胞周期蛋白E有很高的同源性。组织分布分析表明,该基因在斑节对虾精巢、卵巢、肠、脑、肝胰腺、胃和心脏组织中均有表达,其中卵巢中表达量较高,而心脏、胃及肝胰腺中表达量相对较低。分别对蜕皮抑制激素(MIH)注射和眼柄切除的对虾进行表达分析,发现眼柄切除后,Pmcyclin E大量表达,而注射MIH后细胞Pmcyclin E的表达量相对降低。结果表明,细胞cyclin E基因在斑节对虾卵巢发育过程中起重要作用,且眼柄切除对细胞cyclin E的表达具有影响,该结果为进一步探究斑节对虾卵巢的发育机理提供了理论依据。
- 赵超傅明骏江世贵周发林杨其彬朱彩艳邱丽华
- 关键词：斑节对虾细胞周期蛋白E克隆基因表达卵巢发育
- 斑节对虾C1q结合蛋白(PmC1qBP)的克隆及表达特征分析被引量：4
- 2011年
- C1q结合蛋白(C1qBP)是补体系统中的一种重要成分,它能与游离的补体分子C1q的胶原样区相互作用并启动多种细胞反应,包括增强吞噬作用、促进吞噬细胞对微生物的杀伤、诱导趋化作用,从而增强生物体的免疫性。本实验从构建的斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织cDNA文库中筛选并克隆了PmC1qBP基因。为研究PmC1qBP在斑节对虾中的生物学功能,采用半定量和荧光定量的方法研究比较了PmC1qBP基因在雌雄个体不同组织及卵巢不同发育阶段的差异表达情况。结果表明:雌雄个体的PmC1qBP基因在性腺、胃、血细胞、肠中表达量存在极显著差异(P<0.01)。同时,PmC1qBP在无节幼体和蚤状幼体时表达量低,从糠虾幼体至卵巢发育成熟过程中表达量有所增加并趋于稳定,揭示PmC1qBP是斑节对虾卵巢发育过程的重要功能基因。应激实验结果表明,经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激6 h后PmC1qBP在肝胰腺中的表达量极显著上调,提示PmC1qBP参与了斑节对虾天然免疫应答,暗示其在斑节对虾先天性免疫调控中发挥着重要的作用。
- 刘先军杨丽诗黄建华周发林杨其彬江世贵
- 关键词：斑节对虾表达谱发育天然免疫
- 斑节对虾腺苷酸转移酶(PmANT)基因的cDNA克隆与表达分析被引量：1
- 2013年
- 利用RACE技术获得了斑节对虾(Penaeus monodon)ANT基因(PmANT)的cDNA序列。该序列全长1 388 bp,开放阅读框(ORF)为930 bp,3'非编码区(UTR)为393 bp,5'非编码区(UTR)为65 bp。ORF可编码309个氨基酸,分子量大约为33.622 ku。与所有ANT家族成员一样,PmANT蛋白具有3个重复同源的线粒体跨膜结构域,但不含信号肽和糖基化位点。相似性、同源性及系统进化树分析显示,斑节对虾的ANT基因与凡纳滨对虾的同源性和相似性最高,并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了ANT基因在雌雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟和成熟精巢的差异表达情况。结果表明:PmANT的mRNA在各组织中都有表达,其中,在雄性个体的肌肉中表达量最高,其次为雌性肌肉,在精巢的表达量最低,且未成熟精巢低于成熟精巢。PmANT的mRNA在卵巢的表达量高于精巢,且在Ⅲ期卵巢表达量最高,Ⅳ期最低。为今后进一步研究该基因在斑节对虾性腺发育中的作用提供基础材料。
- 孙文文周发林黄建华邱丽华杨其彬江世贵
- 关键词：斑节对虾克隆
- 3种来源的野生斑节对虾携带病毒情况调查被引量：6
- 2011年
- 利用PCR方法,对2008年取自3个斑节对虾主产地(中国、泰国、非洲)的野生斑节对虾亲虾进行主要病毒病筛查。在所检测的210例野生亲虾样本中,均发现携带白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)或斑节对虾杆状病毒(MBV)的阳性样本,其中泰国来源的斑节对虾亲虾WSSV携带率最高,达到89.8%,而中国来源的斑节对虾亲虾IHHNV携带率最高,为8.8%。12例样本同时检测出WSSV和IHHNV(阳性率为5.7%)。该结果揭示3种来源的斑节对虾亲虾普遍携带WSSV和IHHNV,其中WSSV仍然是感染斑节对虾的主要病原。调查结果增进了对斑节对虾主产区野生亲虾健康状况的了解,并在一定程度上揭示了WSSV感染的新规律。
- 杨丽诗黄建华孙苗苗周发林杨其彬温为庚
- 关键词：PCR检测白斑综合征病毒斑节对虾杆状病毒
- 斑节对虾钙网蛋白基因cDNA克隆和表达分析
- 2012年
- 采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE)获得了1 672 bp的斑节对虾钙网蛋白(Penaeusmonodon calreticulin,PmCRT)基因cDNA序列。该序列包含37 bp的5'非编码区(UTR)和414 bp的3'非编码区(UTR)以及1 221 bp的开放阅读框(ORF),可编码406个氨基酸。预测的分子量约为46.8ku,理论等电点为4.13。序列比对分析表明PmCRT与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的相似性和同源性最高,分别为100%和98.8%。实时荧光定量PCR对组织表达检测的结果可知,PmCRT的mRNA在卵巢、肝胰腺、肌肉、脑、心脏、胃、眼柄和肠均有表达,卵巢的表达量最高,肌肉次之;对卵巢发育6期变化检测可知,PmCRT的mRNA在Ⅲ期卵巢表达量最高,Ⅰ期的表达量最低。以期为进一步研究该基因在斑节对虾卵巢发育中的作用提供基础数据。研究亮点:目前对斑节对虾卵巢发育的分子调控机理还知之甚少,有大量卵巢发育相关基因还不为人所知。本文研究了钙网蛋白在斑节对虾卵巢发育各期的表达谱,为阐明斑节对虾卵巢发育分子调控机理提供基础数据。
- 郑丽明周发林杨其彬黄建华邱丽华苏天凤杨丽诗江世贵
- 关键词：斑节对虾钙网蛋白克隆
- 斑节对虾MKK4基因的表达分析被引量：1
- 2012年
- 从斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织cDNA文库中筛选并获得了斑节对虾MKK4基因的cDNA片段,然后采用荧光定量的方法研究了MKK4基因在雌雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟和成熟精巢的差异表达情况。结果表明,MKK4的mRNA在各组织中都有表达,其中在未成熟精巢中表达量最高,其次分别为雌、雄个体的肠。在精巢不同发育阶段,其在未成熟精巢的表达量极显著高于成熟精巢。对卵巢不同发育期的研究表明,从Ⅱ期开始,随着卵巢的发育,MKK4mRNA的表达量逐渐增加,到第Ⅵ期时表达量达到最高。而在Ⅰ期的表达量虽高于Ⅱ期和Ⅲ期、低于Ⅳ期,但其与其他3期均无显著差异。
- 孙文文杨丽诗苏天凤杨其彬朱彩艳周发林
- 关键词：斑节对虾
