国家自然科学基金(31170027)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：邵蔚蓝乐易林张永昌王未未刘明杰更多>>
- 相关机构：江苏大学南京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 纤维素乙醇高温发酵的研究进展与展望被引量：3
- 2013年
- 利用高温细菌发酵,纤维素乙醇生产有望实现"生物质降解-乙醇发酵-乙醇蒸馏"过程的同步化,从而最大限度地降低纤维素乙醇的生产成本;这是一个目标更高、道路更远、科学性更强的可再生能源发展策略。纤维素乙醇高温发酵研究已经取得了重要进展,目前面临的主要挑战包括发酵乙醇的高温细菌的遗传转化系统不够稳定、缺少内源的高活性和耐热性纤维素酶,以及乙醇代谢调控机理有待进一步解析。这些科技难题将会在DNA生物合成和进化技术、细胞生物学技术,以及合成生物学技术的发展中得到解决。
- 乐易林邵蔚蓝
- 关键词：纤维素乙醇代谢调控遗传转化系统合成生物学
- 通过原位易错PCR一步构建基因突变文库被引量：3
- 2014年
- 主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术。本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性—退火—延伸—连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP)。原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除。筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变。利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法。
- 王未未张永昌刘明杰邵蔚蓝
- 关键词：定向进化
- 一种低温表达型T载体及其应用被引量：1
- 2015年
- 在现代生物学和生物技术研究中,通过基因重组表达获得目标蛋白已成为常规技术。因其培养简单、操作方便、遗传背景清楚、克隆表达技术成熟,大肠杆菌表达系统通常是人们表达重组蛋白的首选。但是在常规温度下进行基因的重组表达,动、植物和常温微生物的基因产物多数在数小时内变性沉淀;还有一些重组蛋白对宿主具有细胞毒性,难以得到重组表达。因此,我们构建了1种新型T载体——pEXC-T;它结合TA克隆技术和低温诱导表达功能,具有表达水平高、操作方便、目标蛋白得到分子伴侣保护和低温保存等特点。采用构建和优化的pEXC载体,P1抗原蛋白、溶血素PLO两种不稳定性蛋白在pEXC中都实现了高效的可溶性表达。低温表达系统p EXC的建立和发展为蛋白质的结构与功能的研究,以及抗原和药用蛋白的制备提供了便利的途径。
- 何燕斌齐亚坤黄霖霆周蓉邵蔚蓝
- 关键词：大肠杆菌可溶性蛋白
