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实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测被引量：2: 2006年; 目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术用于骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因检测的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR Green I技术,检测21例MDS患者的SLC7A5基因表达情况,并以IDA、ITP、增贫及其他贫血19例为对照组。结果实验组和对照组SLC7A5基因的表达无明显的统计学差异。结论real-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便、快捷、准确的方法。; 祁小飞陈子兴; 关键词：实时荧光定量PCR 骨髓增生异常综合征基因

MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达被引量：3: 2007年; 目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用。方法以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析。结果MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P<0.005)。随着病情的进展,TRF1表达升高(P<0.005);随着病情的改善,TRF1表达降低(P<0.01)。结论TRF1 mRNA随着病情变化在MDS患者骨髓的表达改变,提示TRF1作为端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一。; 焦雪丽陈子兴岑建农何军刘丹丹陈文明; 关键词：端粒相关蛋白骨髓增生异常综合征基因

抗CD44单抗IM7对慢性粒细胞白血病CD34^＋细胞黏附和迁移能力影响的体外研究被引量：1: 2010年; 目的探讨抗CD44单抗IM7在体外对慢性粒细胞白血病（CML）干细胞（LSC）黏附和迁移的影响及其机制.方法取20例初诊CML患者骨髓及20名健康新生儿脐血标本,用免疫磁珠分离法分离纯化CML患者骨髓和正常人脐血CD34^＋细胞,流式细胞术检测CD123和CD44的表达情况,MTT法检测CD44单抗IM7孵育前后细胞的黏附能力,体外跨内皮迁移实验检测其迁移能力.结果 ①CML患者骨髓CD34^＋细胞（CML-CD34^＋细胞）中CD34和CD123双阳性细胞率为7.5%,CD44阳性细胞率为（86.60±2.10）%;脐血CD34^＋细胞中CD44阳性细胞率为（25.40±1.70）%,两组之间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.②与IM7孵育后的CML-CD34^＋细胞与血管内皮细胞黏附能力为0.34±0.07[吸光度（A）570值],未经IM7处理组为0.62 ±0.11,CML-CD34^＋细胞经IM7处理后的黏附能力显著下降,而脐血CD34^＋细胞IM7处理前后无明显变化.③跨内皮迁移实验显示经IM7处理后的CML-CD34^＋迁移能力明显受到抑制,抑制率为46%～63%,而CD34^＋细胞迁移抑制不明显.④经IM7处理后的CML-CD34^＋细胞与骨髓基质细胞黏附能力明显降低,而脐血CD34^＋细胞IM7处理前后无明显变化.结论 CML患者来源的CD34^＋细胞与脐血CD34^＋细胞为性质不同的造血干细胞,抗CD44单抗IM7在体外能有效抑制CML-CD34^＋的黏附和迁移,从而为白血病的靶向治疗提供依据.; 章龙珍丁昕李向阳岑建农陈子兴; 关键词：细胞黏附

抗CD44单克隆抗体IM7在体外诱导慢性髓系白血病干／祖细胞的凋亡被引量：2: 2010年; 本研究探讨抗CD44单克隆抗体IM7在体外诱导慢性髓系白血病干/祖细胞(leukemic stem/progenitor cells,LSPC)凋亡情况及其可能的作用机制。取20例初诊的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)病人骨髓液5-10ml,用免疫磁株分离法分离出CD34+、CD38-、CD123+LSPC。利用Annexin-V试剂盒检测IM7诱导CML-LSPC凋亡情况;荧光实时定量PCR及RT-PCR检测CML-LSPC中原癌基因c-myc、NF-κB表达水平;Western-blot检测IM7孵育后CML-LSPC中BCL-2蛋白表达变化。结果表明:经IM7孵育后CML-LSPC的早期凋亡率由对照组(5.42±1.84)(升高至(12.58±2.84)((p<0.05)。IM7孵育后CML-LSPC中原癌基因c-myc、NF-κB mRNA表达水平明显降低,IM7能有效抑制CML-LSPC中BCL-2蛋白表达下调,CML-LSPC中NF-κB的活性受到抑制。结论:抗CD44单克隆抗体IM7能有效诱导CML-LSPC凋亡,其可能机制为NF-κB的活性降低,作为下游靶基因c-myc及bcl-2表达下调,从而诱导LSPC凋亡。; 章龙珍丁昕李向阳沈宏杰岑建农陈子兴; 关键词：慢性髓系白血病

骨髓增生异常综合征患者P16的表达态势分析: 2008年; 目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞中P16基因表达异常态势,为寻找MDS患者分子诊断标记提供实验依据。方法采用荧光实时定量聚合酶联反应检测44例初诊和18例治疗后MDS患者骨髓单个核细胞中P16基因mRNA表达水平,并与15例非MDS贫血患者相比较。磁珠分选8例初诊MDS患者CD34+细胞,并用流式细胞仪检测细胞纯度。检测MDS患者骨髓单个核细胞及CD34+细胞中P16表达水平。结果在单个核细胞中,初诊MDS组与治疗后MDS组P16基因表达水平均显著高于非MDS贫血组,差异均有高度统计学意义(P<0.001)。流式细胞仪检测CD34+细胞纯度为96.7%,在CD34+细胞中,初诊MDS组P16基因表达水平显著高于非MDS贫血组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MDS患者P16表达异常可发生在CD34+细胞,也可发生在分化后较成熟的单个核细胞。P16基因可作为MDS鉴别诊断的分子标志物之一,其在MDS患者细胞凋亡中可能发挥作用。; 沈宏杰陈子兴王元元祁小飞岑建农; 关键词：P16 骨髓增生异常综合征实时定量RT-PCR 干细胞

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞中PACAP基因的异常表达(英文): 2009年; Objective: To explore the expression pattern of PACAP gene in patients with myelodysplastic syndrome (MDS). Methods: The expression pattern of PACAP gene in CD34+ cells from MDS patients was determined by microarray, con- firmed in expanding samples by quantitative real-time PCR in bone marrow mononuclear cells. Results: The transcription of PACAP gene was found significantly down-regulated in patients with MDS in comparison with that in control samples, with a means of 220.1 in MDS-RA and 116.8 in MDS-RAEB (P < 0.05 ). Conclusion: PACAP gene is expressed significantly lower in patients with MDS.; Stella Aprilia Ika; 关键词：骨髓增生异常综合征骨髓细胞 PACAP 基因异常表达

基于荧光微球液相基因表达阵列的建立被引量：1: 2011年; 建立基于荧光微球的液相基因表达阵列,用于特定基因组合的表达谱分析.采用带有不同强度荧光鉴别信号的羧基化微球,与氨基修饰的不同标签寡核苷酸序列化学偶联,制成微球阵列.多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)用于扩增靶基因核苷酸序列,即通过RNA标本六随机引物逆转成cDNA,与不同基因特异性的一对探针杂交,耐高温的连接酶联接,最后采用生物素标记的同一对引物扩增.PCR产物与微球阵列液相杂交,加入链亲和素标记的PE染料,上流式细胞仪检测.应用这一系统检测骨髓增生异常综合症中难治性贫血(RA)、难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)、难治性贫血伴转化中原始细胞增多(RAEBt)、急性髓细胞性白血病(AML)和其他组(包括再生障碍性贫血、血小板减少、巨幼贫、溶贫等)差异表达谱,差异表达结果用实时荧光定量PCR验证.共建立了5个基因的微球阵列,分别为Rap1GAP、RAC2、SPA1、RhoBTB3和内参GAPDH,每个基因检测的线性范围为0.002 5～0.1μmol,液相表达阵列具有良好的特异性和重复性(P<0.001).检测RA、RAEB、RAEBt、AML和其他组差异表达发现,RAC2、RhoBTB3、SPA-1和Rap1GAP各组间有显著性差异性存在(分别为P<0.000 1,P=0.049 1,P=0.020 6和P=0.004 6),其差异显著性与实时荧光定量PCR一致,泊松相关系数分别为0.930,0.946,0.945和0.921,具显著性(P<0.001).结果表明,成功建立了基于荧光微球的液相基因表达阵列,其敏感性高、特异性强、重复性好.; 邵雪君陈子兴缪美华岑建农沈宏杰; 关键词：基因表达谱微球流式细胞杂交

骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞中基因转录态势的研究被引量：4: 2006年; 我们试图应用骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓单个核细胞（MNC）和正常对照骨髓细胞的RNA逆转成的cDNA与cDNA基因芯片杂交，检测出MDS细胞的特异性转录态势，从中选出MDS特异性表达的某些基因，加以证实，为MDS的诊断提供可能的分子标志。; 祁小飞陈子兴钱军苗雨青; 关键词：骨髓单个核细胞基因转录特异性表达 MDS 骨髓细胞

低剂量照射对慢性髓细胞白血病干细胞p16基因mRNA表达水平的影响及其意义: 2010年; 目的探讨低剂量辐射（LDR）对慢性髓细胞白血病干细胞（LSCs）中P16基因转录表达的影响及其临床意义.方法取20例健康产妇脐血100 ml,免疫磁株法分离纯化CD34＋、CD38-的正常造血干细胞（HSCs）作为对照组;取20例初诊慢性髓细胞白血病（CML）慢性期患者骨髓液5-10 ml,免疫磁株法分离纯化CD34＋、CD38-、CD123＋的LSCs作为实验组.将HSCs及LSCs依据LDR剂量（0、12.5和50 cGy）辐照后收集细胞行RT-PCR和荧光实时定量PCR检测两种干细胞中p16基因的变化;另辐照后分别于24、48和72 h收集细胞,流式细胞仪检测两种干细胞的细胞周期和凋亡率.结果 CML-LSCs经12.5 cGy剂量照射后P16 mRNA表达略上调,50 cGy照射后明显增高（Z=-3.39,P〈0.01）,而HSCs经各剂量点LDR处理后p16基因转录水平无明显变化.CML-LSCs经12.5 cGy剂量处理后48 h出现G0/G1期阻滞,50 cGy剂量点照射后72 h出现了G0/G1期阻滞现象.CML-LSCs经LDR处理后,细胞的早期凋亡率随时间推移逐渐增加,50 cGy剂量照射后72 h处达到（17.75±11.76）%,与未照射组（6.13±4.71）%相比差异有统计学意义（Z=-2.37,P〈0.05）.结论 LDR可诱导CML-LSCs中P16基因转录水平的表达上调,使得CML-LSCs阻滞在G0/G1期,促进LSCs的凋亡,为P16基因作为CML中治疗的靶点及LDR在白血病中的应用提供理论依据.; 章龙珍丁昕李向阳岑建农沈宏杰陈子兴; 关键词：低剂量辐射 P16基因白血病干细胞

BMI-1基因mRNA与骨髓增生异常综合征进展和预后相关性分析被引量：3: 2008年; 骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于骨髓干／祖细胞的恶性克隆增殖性疾病，随着诊断方法的不断完善，如何从分子水平对MDS进行诊断是最近几年研究的重点。Mihara等发现，BMI-1蛋白质在MDS患者CD34^＋细胞中的表达可以作为该病诊断的一个分子标志。BMI-1属于聚梳蛋白家族（Polyeomb group，PcG）癌基因。我们应用实时定量RT—PCR检测BMI-1 mRNA在MDS患者骨髓单个核细胞中的表达水平并分析其临床意义。; 沈宏杰陈子兴费敏祁小飞岑建农王元元何军姚利邱桥成; 关键词：骨髓增生异常综合征 BMI-1 基因MRNA 预后相关性恶性克隆增殖性疾病 CD34^+细胞

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