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1例HCV不同基因型/亚型混合感染的确认: 2015年; 目的：鉴定1例NS5B区和E1区PCR产物测序结果分型不一致的HCV病毒株为基因重组还是混合感染。方法：提取血浆的病毒总RNA,逆转录后进行巢式PCR扩增,以NS5B和E1编码区为目的基因进行PCR扩增并测序,通过构建进化树进行基因分型,发现两个编码区基因分型的结果不同,对NS5B和E1区进行克隆测序,每个编码区分别挑取50个克隆进行测序和基因分型;针对HCV全长序列分别设计7对型特异性引物并进行PCR扩增。结果：NS5B（8256-8641 bp）区PCR产物测序后的分型结果为1b,E1（697-1322 bp）区为2a;NS5B（8266-9274 bp）基因的50个克隆测序结果均为1b,C/E1（849-2152 bp）基因的50个克隆测序结果均为2a;7个片段的PCR型特异性扩增以及进化分析发现,在同一区域既存在1b亚型,也存在2a亚型。结论：该病例为1b和2a的混合感染。; 许茹王敏廖峭黄珂熊华平黄杰庭陈秋宇戎霞付涌水; 关键词：丙型肝炎病毒克隆测序

轮状病毒颗粒样候选疫苗研究现状和展望: 2021年; 人轮状病毒(rotavirus,RV)是引发全球性人类非细菌性急性胃肠炎疾病的主要病原体之一,减毒活疫苗是预防RV感染的有效手段。为了提高RV疫苗的安全性,开发活病毒疫苗以外的其他形式疫苗,如灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒(virus like particle,VLP)等,以避免减毒疫苗株通过回复突变恢复毒力、导致严重不良反应(如肠套叠)或造成环境污染,本文就RV VLP疫苗的研究进行综述和展望。; 杜加亮刘艳; 关键词：轮状病毒病毒样颗粒疫苗

深度测序法在检测HCV不同基因型/亚型混合感染中的应用被引量：2: 2015年; 目的将深度测序法用于HCV感染者中不同基因型/亚型混合感染的检测。方法 2例HCV RNA阳性血浆标本(标记为1和2号标本),以NS5B和E1编码区为目的基因,经RT-PCR扩增后做sanger核苷酸序列测定,对其做基因分型发现2个编码区的分型结果后,重复3次NS5B基因PCR扩增;合并3次PCR产物用Ion TorrentTM半导体测序仪做深度测序。获得的序列用Geneious软件的"The map to reference algorithm"和"De novo assembly"2种方法做序列分析和比对,并用Mega 5构建进化树。结果 sanger测序:1、2号标本NS5B基因分型均为1b,E1基因分型均为2a;深度测序:2个标本均为HCV 1b与2a混合感染,其中The map to reference algorithm(Geneious)方法显示,1号标本中1b占92.7%、2a占3.8%、没有比对到的序列(unused seq)占3.5%,2号标本相应为84.3%、5.4%,没有比对到的序列占10.3%;De novo assembly(Geneious)方法显示,1号标本中1b占96.3%、2a占3.7%,2号标本相应为94.1%、5.9%。结论深度测序技术可以精确地获得HCV混合感染的不同基因型/亚型信息,De novo assembly(Geneious)分析HCV的深度测序数据更为精确和直观。; 许茹黄杰庭王敏梁明月廖峭黄珂熊华平戎霞付涌水; 关键词：丙型肝炎病毒 HCV基因型

结核分枝杆菌IFN-γ体外检测试剂的生产质量控制与临床研究探讨被引量：1: 2013年; 依据《体外诊断试剂注册管理办法(试行)》等相关的法律法规,分别针对结核分枝杆菌IFN-γ(interferon gamma,γ干扰素)体外检测试剂盒的主要原材料、生产工艺、产品质量控制,以及临床研究的技术要求进行了概述,为该类试剂盒的研发和注册提供技术支撑。; 都伟欣陈保文徐苗杨蕾卢锦标王国治; 关键词：分枝杆菌结核 Γ干扰素释放试验

16S rRNA序列分析法与传统生化分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究: 2019年; 目的比较16S rRNA序列分析法与传统生化分析法鉴别54株分枝杆菌模式菌株的异同。方法采用PCR方法扩增54株分枝杆菌模式菌株16S rRNA序列,通过序列比对构建发育树状谱,计算相似性,并与传统生化分析分型结果进行比较。结果16S rRNA序列分析可鉴定出41株(41种)分枝杆菌,其它6组(包括13株11种)的分枝杆菌16S rRNA序列两两之间相同无法区别,传统的生化分析方法难以区分鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌和偶然分枝杆菌,但采用16S rRNA很容易区分;16S rRNA基因无法区分海分枝杆菌与溃疡分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌,但采用传统生化分型方法很容易区分。结论在分枝杆菌的分型鉴定方面,分枝杆菌16S rRNA基因序列分析与传统分型均十分有效,且两者的联合应用,能够提高鉴定的准确性。; 叶雅丽闫李侠黄至澄陈保文王国治; 关键词：分枝杆菌

记忆性CD4^＋T细胞的形成及其影响因素被引量：3: 2015年; 疫苗设计的关键在于产生足够数量和质量的抗原特异的记忆性淋巴细胞,使得机体获得长期保护以抵御病原体的再次感染。CD4+T细胞能够分化为多种辅助性T细胞和调节性T细胞,在适应性免疫反应中发挥重要作用,不仅参与体液免疫而且参与细胞免疫的调节。那么哪些效应性CD4+T细胞能够转化为记忆性细胞,哪些因素影响该过程成为疫苗研发者所关注的重点,对疫苗株的筛选、免疫程序设计和佐剂的使用等均具有指导性作用。本文主要综述了近几年关于记忆性CD4+T细胞形成的细胞学基础及其影响因素的研究进展,为疫苗研发和效果评价提供参考。; 刘悦越国泰李琦涵; 关键词：记忆性T细胞 CD4+T淋巴细胞适应性免疫

进口轮状病毒疫苗RotaTeq的热稳定性被引量：3: 2020年; 目的分析进口轮状病毒(rotavirus,RV)疫苗RotaTeq(RV5)的热稳定性。方法采用荧光定量PCR法分别测定22~25和37℃条件下放置不同时间的RV5疫苗滴度,以参考疫苗株滴度为标准,计算RV5疫苗5个型别毒株(G1、G2、G3、G4、P1)滴度和总滴度。同时扩增RV5疫苗G3型毒株的VP7序列,并与GenBank中登录的原型病毒株r G3的VP7序列进行比较。结果22~25℃条件下,G1、G2、G3、G4、P1型毒株滴度和总滴度每天下降速度分别为3.51%、2.26%、3.19%、5.22%、3.18%和3.61%,各型别毒株间差异无统计学意义(P>0.05);37℃条件下,G3型毒株滴度的下降速度(31.20%/h)明显高于其他型别毒株(G1、G2、G4、P1下降速度分别为每小时0.75%、0.31%、1.08%和2.07%),差异有统计学意义(P<0.05)。G3型毒株滴度于37℃的半衰期仅为0.07 d,其原型株rG3的半衰期可达2.10 d。RV5疫苗G3型疫苗株与其原型株的差异包括散在的氨基酸差异(F32L、T69A、L83F、I118T、D151G、P275L)及位于5′UTR(T25C)和3′UTR(G1041A、A1045G、G1046A、G1047A、C1048T、A1053T)较聚集的核苷酸差异。结论RV5疫苗中各型别毒株在22~25℃时热稳定性良好,但在37℃时G3型疫苗株是影响RV5疫苗热稳定性的关键,位于VP7 UTR的核苷酸突变可能是导致其热稳定性降低的主要原因。; 杜加亮刘艳焦洋于晴川刘悦越赵荣荣高加梅范行良国泰; 关键词：轮状病毒热稳定性非翻译区

浙江沿海地区无偿献血人群HTLV感染的流行病学与知晓情况调查被引量：22: 2017年; 目的了解浙江沿海地区无偿献血者人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)感染状况,提出综合性防控策略。方法采用ELISA方法筛查2013-2015年浙江省沿海6市(区)无偿献血者58 609(人)份血清中抗-HTLV-Ⅰ/Ⅱ,阳性者以WB法确证,并做HTLV基因测序和同源性分析;随机对10 197名献血者开展HTLV知晓情况问卷调查。结果本组献血者人群的抗-HTLV阳性率0.01%(5/58 609),抗体类型为抗-HTLV-Ⅰ,均属世界群世界人种亚型;该5位HTLV感染者均为本地首次献血者,其中台州市发现的HTLV毒株与福建泉州的分离株同源,舟山市发现的HTLV毒株与日本的分离株MT-2同源。献血者对HTLV的知晓情况:随机问卷调查(10分制)人均得分0.75(0-8)分,其中<1分者占调查对象的79.0%(8059/10 197),>5分者占1.40%(143/10 197)。结论浙江沿海台州和舟山地区献血人群中存在HTLV感染和散在的小流行;献血者对HTLV的知识极其匮乏,亟待采取相应防控策略。; 王拥军金秀国关亮李建华杜勇陈李孟忠华周华平; 关键词：人类嗜T淋巴细胞病毒献血者

柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定被引量：2: 2016年; 目的制备柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法将验证合格的CA16（C1亚型）培养液分装（0.5 ml/支）制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K（a）rber法计算半数细胞感染量（50％ cell culture infective does,CCID50）.同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22～25（室温）和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果制备的CA16参考品的病毒滴度为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22～25℃（室温）和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4％和4.4％,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8％/次.结论成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.; 杜加亮刘悦越于晓方张文艳贾双双刘艳赵岩国泰; 关键词：肠道病毒属国家参考品

丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备: 2014年; 目的制备丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）核酸检测试剂国家参考品。方法收集我国不同地区的献血员血浆,用核酸筛查试剂筛查HCV RNA情况,并通过PCR法对人细小病毒B19进行定性测定,筛选阳性参考品、阴性参考品和最低检出限参考品。对HCV RNA阳性样本进行基因分型;3家实验室以WHO HCV RNA国际标准品为对照品,对参考品进行协同标定;并检测参考品的稳定性和适用性。结果筛选出10份HCV阳性,而HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阳性参考品,其中有6份为1b型,1份为2a型,1份为3a型,1份为3b型,1份为6a型;10份HCV、HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阴性参考品;1份冻干的HCV RNA阳性,HBV、HIV、B19为阴性的样本作为最低检出限参考品,基因型为1b型。3个实验室经协作标定,阴性参考品的结果均为阴性,阳性参考品的HCV RNA浓度在104～105IU/ml之间,最低检出限参考品的HCV RNA浓度为6.18×106IU/ml。-20℃放置4周、4℃放置12 d、室温放置7 d以及反复冻融5次对参考品的HCV RNA含量无明显影响。参考品适用于目前国内市场上主要国产血液筛查和定量试剂的检测。结论制备了HCV核酸检测试剂国家参考品,可用于HCV核酸诊断试剂的质量评价和控制。; 刘悦越刘艳杜加亮范行良高加梅国泰; 关键词：丙型肝炎病毒核酸参考品

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国家科技重大专项(2012ZX10004702)

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