海外青年学者合作研究基金(30128009)
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
- 相关作者：姜勇刘志锋刘靖华张丽华宋革更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金广东省科技计划工业攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 线粒体转录因子A的研究进展
- 2006年
- 线粒体转录因子A是HMG蛋白家族中的成员,目前已知除了可以调控线粒体DNA的拷贝数和转录活性、参与细胞凋亡外,还可对人的寿命和疾病产生影响,如甲状腺功能减退性肌病和线粒体脑病等。近来研究还发现m tTFA也可在细胞核内发挥作用,提示核及线粒体基因表达调控的机制上存在偶联或协同作用。本文主要总结近年来关于线粒体转录因子A的研究进展,从其基因学定位和结构、蛋白质结构、基因表达调控及其主要功能做一概述,同时总结不同研究过程中提出的未知问题,并对进一步的研究方向做一展望。
- 刘志锋姜勇
- 关键词：线粒体转录因子线粒体转录因子A
- His标记的小鼠线粒体转录因子A的克隆和表达纯化及其多克隆抗体的制备
- 2005年
- 目的表达和纯化带His标记的小鼠线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,mtTFA)融合蛋白,并制备mtTFA的特异性多克隆抗体。方法提取正常BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出无信号肽的mtTFA编码序列,克隆入经KpnⅠ和BamHⅠ酶切后的pET14b。酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍离子亲和树脂(Ni2+-NTAHis·BindResin)纯化融合蛋白。用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果成功克隆出了mtTFA的编码序列,并构建了带His标记的小鼠mtTFA融合蛋白的重组表达质粒pET14b/His-mtTFA。表达的融合蛋白经亲和树脂纯化后得到大量的高纯度目的蛋白,获得了高特异性兔抗血清。结论获得了His标记的小鼠mtTFA原核表达载体,纯化得到高纯度的目标蛋白,并制备出高特异性兔抗血清,对进一步研究其生物学功能及调节细胞核同线粒体之间功能协同性的信号通路有重要意义。
- 刘志锋邵紫韫徐佳刘靖华邓鹏姜勇
- 关键词：线粒体转录因子A融合蛋白基因克隆蛋白表达
- 带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究被引量：10
- 2003年
- 采用点突变技术构建了带 6×His、Tat和Flag多个标记的pET HTF的质粒载体 ,利用基因重组技术构建pET HTF EGFP融合蛋白载体 .酶切和DNA测序证明 ,所构建的pET HTF和pET HTF EGFP载体正确 .BL2 1(DE3)表达融合蛋白 ,用Ni2 + 分离柱纯化His Tat Flag EGFP蛋白 ,并加入培养的NIH3T3细胞 .荧光显微镜观察显示 ,His Tat Flag EGFP融合蛋白进入细胞 .带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET 14b HTF表达的融合蛋白能够进入细胞 。
- 孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇
- 关键词：质粒载体融合蛋白细胞增强型绿色荧光蛋白蛋白转导
