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坏死梭杆菌44.5ku外膜蛋白的免疫原性分析被引量：4: 2016年; 为分析从坏死梭杆菌中获得的44.5 ku外膜蛋白(OMP)免疫小鼠后的免疫原性,用SLS和LDS等试剂从坏死梭杆菌中提取44.5 ku外膜蛋白,将其作为免疫抗原经弗氏不完全佐剂乳化免疫小鼠,3次免疫后采血,获取血清并进行抗体效价、Western-blotting免疫原性和保护力检测。结果显示,三免后试验组小鼠血清抗体效价高,同时在攻毒试验中具有较好的保护力,Western-blot显示具有较好的反应特异性。结果表明,坏死梭杆菌44.5 ku外膜蛋白具有较好的免疫应答水平,为坏死梭杆菌亚单位疫苗的研究提供了基础数据。; 徐晶陈立志李淑艳冯二凯; 关键词：坏死梭杆菌外膜蛋白抗原性

致病性坏死梭杆菌溶胶原蛋白提取与毒性分析: 2013年; 为验证坏死梭杆菌的溶胶原活性以及溶胶原蛋白在细菌感染宿主早期的可能作用,本研究利用超声波破碎处理、离子交换层析和凝胶过滤技术,从坏死梭杆菌国内流行株(AB株)的菌体分离获得一种具有溶解牛Ⅱ型胶原蛋白能力的溶胶原活性蛋白(CP)。CP的相对分子量约为50 ku,CP的胶原酶活力为20.3 U/mL。将其腹腔接种小鼠,纯化的CP可诱导小鼠出现皮下坏死病灶,肝、脾脏肿大等症状;组织病理学分析表明CP导致小鼠肝细胞出现大面积坏死,并形成肉芽肿病症;另外,CP对小鼠肝细胞(NCTC 1469)表现出细胞毒性作用,出现多种超微结构变化特征,但小鼠巨噬细胞(Ana-1)对CP的敏感性相对较弱。研究结果表明,本研究分离获得的CP的生物学特性与已报道的坏死梭杆菌毒力因子的生物学特性截然不同,推测CP可能是一种新型毒力因子,可能在细菌感染宿主早期入侵宿主过程中发挥重要作用。; 冯二凯王燕刘晓颖陈立志徐晶王秀东冯卓; 关键词：坏死梭杆菌毒力因子细胞毒性

坏死梭杆菌斑马鱼模型建立与LD_(50)的测定被引量：1: 2012年; 建立斑马鱼人工感染坏死梭杆菌动物模型。牛源坏死梭杆菌FN(AB)株以3×1010cfu/mL、3×109cfu/mL、3×108cfu/mL、3×107cfu/mL不同菌量,腹腔接种斑马鱼,定时观察斑马鱼的发病和死亡情况,建立动物感染模型。FN(AB)对斑马鱼的半数致死量(LD50)为1.06×106cfu/尾;感染发病鱼呈现出侧游、腹水、注射部位出血红肿等症状,肝脏、肾脏、肠道出现明显的病理学变化。斑马鱼可作为坏死梭杆菌致病性研究的动物模型。; 曹阅陈立志刘晓颖冯二凯汪孙杰徐晶冯卓; 关键词：坏死梭杆菌斑马鱼动物模型半数致死量

坏死梭杆菌白细胞毒素bsbse-gas-sh真核表达载体的构建被引量：1: 2012年; 根据GeneBank中提供的白细胞毒素基因序列,设计引物并扩增bsbse和gas-sh片段。通过T4 DNA Ligase连接形成融合片段bsbse-gas-sh,亚克隆pMD○R18-T质粒和测序。成功构建表达bsbse-gas-sh毕赤酵母表达载体pPIC9K-bsbse-gas-sh。为下一步bsbse-gas-sh的真核表达及免疫机理研究奠定了基础。; 汪孙杰陈立志刘晓颖冯二凯曹阅徐晶; 关键词：基因克隆真核表达载体

坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达被引量：1: 2013年; 依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。; 徐晶陈立志刘晓颖冯二凯汪孙杰曹阅; 关键词：坏死梭杆菌 OMP 免疫活性

坏死梭杆菌外膜蛋白提取及免疫原性分析被引量：2: 2016年; 从坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,FN)中提取外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)并分析免疫原性。采用无菌心脑浸液(BHI)肉汤培养基培养坏死梭杆菌,用20mmol/L HEPEs-LiCl缓冲液提取外膜蛋白,经SDS-PAGE、Western blot和接种小鼠病理学检测分析表明,具有唯一条带,分子质量为44.5ku,具有良好的免疫活性并有一定毒性,研究结果为坏死梭杆菌亚单位疫苗研制奠定了基础。; 徐晶陈立志刘晓颖冯二凯; 关键词：坏死梭杆菌外膜蛋白免疫活性

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吉林省科技发展计划基金(20110223)