国家自然科学基金(30860329)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 相关作者：朱小东曲颂郭亚苏芳李龄更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院西安交通大学广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼻咽癌细胞辐射抗拒的比较蛋白质组学分析被引量：2
- 2012年
- 目的通过分离并鉴定具有不同辐射抗拒的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE．2的差异表达蛋白，探讨与鼻咽癌细胞辐射抗拒相关的分子机制。方法分别提取鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R及其亲本细胞株CNE-2的总蛋白，采用双向凝胶电泳分离，经软件分析识别差异表达蛋白点，应用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术（MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白质。结果两种不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE-2R和CNE-2中，共筛选出差异表达明显的蛋白质点有32个，其中11个蛋白质被鉴定成功，在CNE．2R中上调的蛋白有3个，下调的蛋白有8个。结论不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞的差异表达蛋白，主要涉及调节凋亡、DNA损伤与修复、细胞周期调控、RNA转录、细胞信号转导、细胞骨架组成及辐射应激反应等多个方面。
- 朱小东黄诗婷曲颂苏芳郭亚王金子
- 关键词：鼻咽癌比较蛋白质组学
- 应用蛋白质的相互作用网络图筛选鼻咽癌放射抗拒相关基因被引量：6
- 2012年
- 目的应用蛋白质相互作用网络图，寻找鼻咽癌放射抗拒相关的分子标志物，探讨鼻咽癌放射抗拒机制。方法应用全基因组表达谱芯片，初步筛选出2种不同放射敏感性细胞株CNE-2R与CNE-2的差异表达基因。采用计算机软件随机选取4个差异表达基因，分别设计引物，用半定量RT—PCR技术检测验证。将2次实验中均出现的差异有统计学意义的基因导入SNOW在线数据库进行分析，绘制差异基因相互作用网络图，网络中心节点作为鼻咽癌放射抗拒相关分子标志物；进一步采用Westernblot检测关键节点STAT1在CNE-2R与CNE-2表达差异。结果CNE-2R与CNE-2相比，2次芯片实验中均出现的差异基因374个，其中差异有统计学意义的基因197个；随机选取的4个差异表达基因RT—PCR结果与芯片扫描结果相似，具有相同的方向性。197个共有的差异有统计学意义的基因编码蛋白经SNOW分析存在相互作用，并构成一个复杂的相互作用网络图，寻找到了关键性的节点为STAT1和JUN。Westernblot结果显示，STAT1-α在CNE-2R中表达明显高于CNE-2（t=4．96，P〈0．05）。结论关键性的节点STAT1和JUN可能是引起鼻咽癌放射抗拒的分子标志物，STAT1-α可能与鼻咽癌放射抗拒发生密切相关。
- 朱小东郭亚曲颂李龄黄诗婷黎丹戎张玮
- 关键词：鼻咽癌放射抗拒基因芯片蛋白质相互作用网络
- RNA干扰抑制c-jun基因表达对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R放射敏感性的影响
- 2014年
- 目的 利用RNA干扰技术抑制放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R中高表达的c-jun基因,研究其对CNE-2R细胞放射敏感性的影响及其潜在机制.方法 设计合成3组特异性针对c-jun基因的siRNA,构建慢病毒vshRNA载体,感染CNE-2R细胞,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组对目的基因的抑制效果;并通过克隆形成实验测定其放射敏感性,CCK-8实验检测细胞的存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 重组慢病毒c-jun-RNAi-LV2能明显下调CNE-2R细胞中c-jun的mRNA和蛋白水平的表达（F =217.20、42.07,P＜0.05）.6MVX射线联合c-jun-RNAi-LV2组在0、2、4、6和8 Gy照射后细胞的吸光度值均显著低于未转染组和阴性对照组（F=42.70 ～ 200.67,P＜0.05）.克隆形成实验显示,c-jun-RNAi-LV2组与未转染组及阴性对照组相比,SF2、D0和Dq值均减小,放射增敏比（SERD0）为1.41.细胞凋亡实验结果显示,未经照射的c-jun-RNAi-LV2组与联合2 Gy照射的凋亡率分别为（20.93±1.99）％和（38.17±0.83）％,均高于未转染组和阴性对照组的凋亡率[0 Gy：（10.97±0.70）％和（20.43±0.25）％;2 Gy：（10.80±1.25）％和（19.53±1.50）％;F=50.54、330.14,P＜0.05].结论 RNA干扰技术可有效抑制放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R中高表达的c-jun基因,使细胞放射敏感性增高,其作用可能与c-jun基因的下调使细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增多有关.
- 郭思言朱小东葛莲英曲颂李龄郭亚梁世雄苏芳
- 关键词：鼻咽癌放射抗拒C-JUN基因RNA干扰
- 人鼻咽癌放射抗拒移植瘤模型的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立稳定的人鼻咽癌放射抗拒移植瘤模型并观察其生长特性,为解决鼻咽癌放射抗拒提供良好的动物模型。方法将人鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R、人鼻咽癌细胞CNE-2分别注入裸鼠左右后肢皮下。移植瘤生长后,隔日测量肿瘤直径,计算肿瘤体积,绘制移植瘤体积生长曲线。肿瘤直径0.8～1 cm时以X线隔日照射移植瘤,1 600 Gy分4次。计算移植瘤体积倍增时间和体积增长率。照射后2周取出移植瘤行常规病理检查,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 CNE-2R、CNE-2细胞的皮下成瘤率均为100%,建模成功。相对于CNE-2移植瘤,CNE-2R移植瘤生长速度慢,生长受照射抑制不明显;PCNA表达较低。结论相对于CNE-2移植瘤,CNE-2R移植瘤具有更强的放射抗拒性,CNE-2R裸鼠移植瘤模型是进一步研究鼻咽癌放射抗拒的有力工具。
- 李小宇朱小东曲颂李龄张玮魏党
- 关键词：鼻咽肿瘤动物移植瘤
- 鼻咽癌移植瘤Annexin A3和Nm23-H1蛋白表达与放射敏感相关性的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨不同放射敏感性鼻咽癌移植瘤中Annexin A3和Nm23-H1蛋白的表达及意义。方法:将不同放射敏感性鼻咽癌细胞CNE-2R和CNE-2分别注射到裸鼠后肢皮下成瘤。成瘤后以X射线分次照射16Gy,计算肿瘤体积及肿瘤倍增时间。采用免疫组化法检测移植瘤中Annexin A3和Nm23-H1蛋白的表达水平。结果:未受照射CNE-2R和CNE-2移植瘤倍增时间分别为4.8和3.9d,受照射CNE-2R和CNE-2移植瘤倍增时间分别为6.2和17.1d。未受照射CNE-2R移植瘤组织Annexin A3蛋白表达明显低于未受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.035±0.012和0.062±0.009,P=0.000;受照射CNE-2R移植瘤组织明显低于受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.029±0.007和0.051±0.009,P=0.000。未受照射CNE-2R移植瘤组织Nm23-H1蛋白明显高于未受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.056±0.007和0.043±0.007,P=0.022;受照射CNE-2R移植瘤组织明显高于受照射CNE-2移植瘤组织,MOD值分别为0.079±0.009和0.046±0.007,P=0.000。结论:CNE-2R移植瘤组织Annexin A3蛋白明显低于CNE-2移植瘤组织,受照射CNE-2R移植瘤组织Nm23-H1蛋白明显高于受照射CNE-2移植瘤组织,与体外实验结论一致,提示与鼻咽癌放射抗拒有关,可作为鼻咽癌放射治疗的新标志。
- 曲颂李小宇朱小东葛莲英李龄梁世雄苏芳郭亚李佳荃
- 关键词：鼻咽肿瘤移植瘤
- 鼻咽癌放射抗拒相关的信号通路被引量：10
- 2011年
- 目的研究具有不同放射抗拒性的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE-2的基因表达潜差异，筛选与鼻咽癌放射抗拒相关的基因信号通路：方法验证已构建的鼻咽癌放射抗拒细胞侏CNE-2R的放射抗拒性，选用Human.6v3.0全基因组表达谱微珠芯卷片，筛选这2种细胞的差异表达基因。对差异基因进行生物信息学分析，寻找与鼻咽癌放射抗拒相关的信号通路。结果CNE-2R与CNE.2相比，2次实验均出现的差异基因374个。差异基因的Kegg通路和Biocarta通路分析发现，Toll样受体信号通路和IL-lR介导的信号转导通路分别对鼻咽癌放射抗拒具有重要生物学意艾。通路上的13个基因JlN、MYD88、CCI。5、CXCI。10、STATl、LY96、FOS、CCL3、IL-6、IL-8、lL-La-1I-lβ、IRAK2表达差异具有统计学意义（t=13.47～66.57，P〈0.05）。结论Toll样信号受体通路和IL-lR介导的信号转导通路激活可能与鼻咽癌放射抗拒相关。
- 郭亚朱小东曲颂苏芳王琪张玮
- 关键词：鼻咽癌信号通路放射抗拒基因芯片
- 人鼻咽癌细胞CNE-2双向电泳样品制备方法的建立
- 2010年
- 目的建立和优化人鼻咽癌细胞CNE-2的蛋白质样品制备方法。方法采用3种不同方法提取CNE-2细胞的蛋白质,并进行双向凝胶电泳实验。结果采用通用裂解液裂解细胞,等电聚焦前在样品中加入Destreak试剂,可以获得图像清晰、分辨率高的双向电泳图谱。结论建立了适合于人鼻咽癌细胞CNE-2总蛋白样品的双向电泳方法,为后续比较蛋白质组学研究奠定基础。
- 黄诗婷朱小东曲颂苏芳王琪张玮
- 关键词：蛋白质提取双向电泳鼻咽癌细胞
- 沉默STAT1基因增强放射抗拒鼻咽癌CNE-2R细胞放射敏感性被引量：2
- 2015年
- 目的 研究基因STAT1沉默对人放射抗拒鼻咽癌细胞放射敏感性的影响.方法 慢病毒介导的STAT1基因转染放射抗拒鼻咽癌细胞CNE-2R,荧光定量RT-PCR技术检测沉默效果.MTT法检测转染前后细胞增殖活性,流式细胞技术检测细胞周期及凋亡,克隆形成实验检测转染前后细胞放射敏感性变化.结果 慢病毒转染后放射抗拒鼻咽癌细胞STAT1表达降低（F=429.87,P＜0.05）、细胞生长抑制（F=3.88 ～4.63,P＜0.05）、凋亡率增加（F =38.13,P＜0.05）、放射敏感性增加（F=252.80,P＜0.05）、细胞周期中G0/G1、S和G2/M期未见明显差异（P＞0.05）.结论 沉默STAT1基因能增加放射抗拒鼻咽癌细胞CNE-2R的放射敏感性.
- 郭亚朱小东曲颂李龄葛莲英黄诗婷赵伟苏芳李烨
- 关键词：STAT1鼻咽癌
- 绿色荧光蛋白标记的鼻咽癌放射抗拒性裸鼠移植瘤模型的建立及其活体成像观察被引量：3
- 2013年
- 目的建立绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的鼻咽癌放射抗拒性裸鼠移植瘤模型,为后续研究奠定基础。方法将以慢病毒转染的方法建立稳定表达GFP标记的人鼻咽低分化鳞癌细胞株GFP-CNE-2和放射抗拒性细胞株GFP-CNE-2R接种至裸鼠体内,建立皮下移植的肿瘤模型。待肿瘤直径约为1 cm时给予相同剂量10 Gy的X射线一次性照射,通过小动物活体成像仪观察移植瘤的生长和转移情况。结果成功建立了稳定表达GFP标记的放射抗拒性及放射敏感的人鼻咽低分化鳞癌细胞株GFP-CNE-2R和GFP-CNE-2。克隆形成实验显示GFP-CNE-2R细胞株具有放射抗拒性。GFP-CNE-2R和GFP-CNE-2细胞的皮下成瘤率均为100%,证实建模成功。相对于GFP-CNE-2裸鼠移植瘤,GFP-CNE-2R移植瘤的生长受照射抑制不明显。结论相对于GFP-CNE-2裸鼠移植瘤,GFP-CNE-2R裸鼠移植瘤具有更强的放射抗拒性。
- 黄小鹏马慧朱小东葛莲英曲颂李龄郭亚赵伟黎丹戎
- 关键词：移植瘤绿色荧光蛋白放射抗拒性
- 沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强(放射增敏比为SER=1.24)。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比,G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变(P<0.05)。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。
- 马嘉林郭亚曲颂赵伟李龄苏芳李烨葛莲英朱小东
- 关键词：鼻咽肿瘤转染
