国家自然科学基金(30640025)
- 作品数：7 被引量：23H指数：2
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- 转染可溶性CD40基因的树突状细胞在体外对T淋巴细胞功能的抑制作用
- 2007年
- 目的探讨转染可溶性CD40（sCD40）基因的树突状细胞（DC）在体外对T淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的细胞毒活性的影响。方法采用脂质体转染法，将携带鼠CD40胞外区和绿色荧光蛋白的融合基因的质粒pEGFP-N1／sCD40转染小鼠DC细胞株（DC2．4）。以Balb／c小鼠淋巴细胞为反应细胞，分别以转染组DC、空载体转染组（空载体组）DC和未行转染处理的DC（空白DC）作为刺激细胞，进行单向混合淋巴细胞培养，四唑氮化合物比色法检测细胞增殖情况。用乳酸脱氢酶释放试验和流式细胞术检测转染组DC及其培养上清液对CTL细胞毒活性及其凋亡的影响。结果转染组DC及其培养上清液对同种细胞刺激的淋巴细胞增殖反应有显著的抑制作用（P〈0．05），并对特异性CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用（P〈0．05）；转染组DC可诱导CTL凋亡（P〈0．05）。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋白的DC，在体外对T淋巴细胞的增殖和CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用，并可诱导CTL凋亡。
- 贺杰峰赵浩亮董胜利裘法祖
- 关键词：树突细胞转染
- sCD40基因修饰树突状细胞抑制T细胞表型及细胞因子分泌
- 2007年
- 目的探讨sCD40基因修饰树突状细胞(DC)对T细胞表型及Th1和Th2类细胞因子分泌的影响及其体外诱导T细胞免疫耐受的机制。方法分别以sCD40基因及空载体修饰的DC (实验组和对照组)作为刺激细胞,尼龙毛柱法收集Balb/c小鼠淋巴细胞作为反应细胞,初次进行混合淋巴细胞培养(MLC)7d。在培养的第1、3、4、5、7天时采用新型四唑氮盐(MTS)比色法检测淋巴细胞增殖率;酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养液上清中的白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)水平;第5天采用流式细胞仪检测CD4^+、CD8^+T细胞上CD25及CD69的表达。再次进行MLC 5d,在培养的第1、3、5天时检测与初次MLC相同的项目,并比较初次及再次MLC后的各项检测指标。结果初次及再次MLC后,实验组(经sCD40基因修饰的DC)刺激细胞增殖反应明显低于对照组(空载体修饰的DC)。初次MLC中,实验组CD4^+、CD8^+ T细胞比例及CD4^+CD25^+、CD8^+CD25^+、CD4^+CD69^+、CD8^+ CD69^+T细胞比例明显低于对照组(P<0.05);实验组和对照组培养液上清中IL-4和IL-10不能测出,而实验组培养液上清中IFN-γ和IL- 2的水平均明显低于对照组(P<0.01)。再次MLC后,培养液上清中IFN-γ、IL-2和IL-4、IL-10的分泌水平均明显低于对照组(P<0.01)。结论体外MLC体系中,经sCD40基因修饰的DC可同时作用于CD4^+和CD8^+T细胞,使CD69和CD25表达降低,引起T细胞早期活化和成熟障碍,抑制T细胞增殖及Th1和Th2类细胞因子的分泌,诱导出T细胞免疫耐受状态。
- 贺杰峰赵浩亮董胜利李辉宇韩振国
- 关键词：树突细胞细胞因子类
- 可溶性CD40分子与EGFP融合基因的构建及在树突状细胞中的表达及功能鉴定被引量：2
- 2007年
- CD40与T细胞表面对应的配体CD154（CD40L）相互作用后，可以进一步刺激抗原提呈细胞，上调其CD80／CD86的表达，促进T细胞的活化。可溶性CD40蛋白（soluble CD40，sCD40）由CD40信号肽和胞外功能区构成，能够与膜表面CD40竞争性结合CD40L的功能区域。
- 贺杰峰赵浩亮徐宗全董胜利裘法祖
- 关键词：CD40分子可溶性CD40树突状细胞EGFPCD80/CD86抗原提呈细胞
- 原发性肝脏类癌的诊断和治疗一例并文献复习
- 2014年
- 目的 探讨原发性肝脏类癌（PHCT）的诊断和治疗经验.方法 回顾山西大医院确诊的1例PHCT的临床资料,并结合国内文献报道的经手术治疗35例PHCT患者的临床资料进行分析.结果 PHCT患者临床表现为上腹疼痛（16例）,腹部肿块（13例）,肝肿大（20例）,少数存在类癌综合征（5例）,术前误诊率86.1％ （31/36）,术后病理确诊为肝脏类癌.有随访记录者术后5年生存率为69.6％（16/23）.结论 PHCT在临床上相对罕见.临床上误诊率极高.其确诊依赖于术后病理学及免疫组织化学检查,手术切除是治疗PHCT的最佳手段,预后较好.
- 贺杰峰赵浩亮董秀山
- 关键词：原发性肝脏类癌
- 大鼠实验性肝癌组织中Treg细胞与TGF-β1、IL-10水平的相关性分析被引量：21
- 2014年
- 目的探讨大鼠肝癌Treg细胞变化与TGF-β1、IL-10的表达水平之间的相关性。方法40只雄性Wistar大鼠分成3组，肝癌模型组（20只）、盐水对照组（10只）、空白对照组（10只），肝癌模型组大鼠按100mg／ko给予腹腔注射二乙基亚硝胺（DEN）诱导肝癌模型。光镜下观察肝组织病理改变，应用流式细胞术检测肝组织Treg细胞的百分率，免疫组化SABC法检测肝组织TGF-β1和IL-10的表达水平，并对Treg细胞、TGF-β1和IL-10的变化进行相关性分析。结果制备大鼠诱导性肝癌模型，流式细胞术检测显示肝癌模型组肝癌组织中Treg细胞占CIM＋T细胞的比例为14．32％±4．84％，显著高于空白对照组的5．64％±6．10％和盐水对照组的7．95％±3．55％，差异有统计学意义（F=211．279，P〈0．05）。肝癌组织中TGF-β1和IL-10的表达高于空白对照组和盐水对照组（FTGF-β1=250．740，FIL-10=152．744，均P〈0．05）。Treg细胞与TGF-β1、IL-10的水平呈明显正相关（P〈0．05）。结论大鼠实验性肝癌组织中TGF-β1、IL-10和Treg细胞水平显著升高，Treg细胞与TGF-β1及IL-10水平显著正相关，共同参与机体对肝癌的免疫抑制作用。
- 张志强贺杰峰张瑜兰志伟赵浩亮
- 关键词：白细胞介素10转化生长因子B1TREG细胞
- sCD40-EGFP融合基因的构建及其在树突状细胞DC2．4中的表达
- 2014年
- 目的构建携带鼠可溶性CD40分子（sCD40）及增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的融合蛋白真核表达质粒pEGFP．N1／sCD40并检测其在树突状细胞（DC2．4）中的表达水平。方法采用基因工程技术构建CD40胞外区与EGFP重组载体质粒pEGFP—N1／sCD40，经酶切及序列分析鉴定，脂质体介导转染DC2．4细胞株，荧光显微镜，荧光分光光度计及SDS。PAGE检测sCD40-EGFP融合蛋白的表达，流式细胞仪检测其活性。结果融合基因在瞬时转染的树突状细胞中获得表达，并分泌至上清，且sCD40-EGFP融合蛋白中分子标签未影响可溶性sCD40膜外活性区的生物学活性。结论可溶性CD40分子与EGFP融合基因载体构建成功，在树突状细胞中表达的融合蛋白具有生物活性，为进一步研究基因修饰树突状细胞诱导特异性移植免疫耐受奠定了实验基础。
- 贺杰峰赵浩亮田彦璋董秀山李辉宇王晋喜赵旭晔
- 关键词：可溶性CD40绿色荧光蛋白融合蛋白质类基因表达树突状细胞
- 可溶性CD40基因修饰树突状细胞对实验动物淋巴细胞增殖及胞毒活性的影响
- 2009年
- 目的探讨可溶性CD40-增强绿色荧光蛋白C(sCD40-EGFP)修饰树突状细胞(DC)对实验动物免疫功能的影响,为利用DC诱导供体特异性移植免疫耐受提供实验依据。方法应用基因工程技术构建CD40胞外区与EGFP重组载体质粒pEGFP-N1/sCD40,采用脂质体转染法,将其导入DC2.4细胞株。采用荧光分光光度计和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定转染质粒pEGFP-N1/sCD40的DC培养上清;将经未修饰DC细胞及sCD40-EGFP及空载体修饰DC经腹腔注射致敏Balb/c小鼠,取单个核细胞作为反应细胞,分别以不同组DC为刺激细胞,行混合淋巴细胞培养,采用MTS比色法检测细胞增殖,乳酸脱氢酶法测定细胞毒活性。结果sCD40分子与EGFP融合基因载体构建成功,在树突状细胞中获得表达,并分泌至上清;sCD40-EGFP融合蛋白对不同组DC致敏或未致敏小鼠的同种细胞刺激的增殖反应均有明显的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC诱导不同DC致敏组小鼠淋巴细胞增殖反应均明显降低,sCD40-EGFP融合蛋白对各实验组淋巴细胞胞毒活性有显著的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC致敏组小鼠淋巴细胞胞毒活性较其余实验组明显降低。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋自的DC致敏可显著降低同种小鼠淋巴细胞的增殖反应,并能诱导淋巴细胞对靶细胞的胞毒活性降低。
- 贺杰峰查运红赵浩亮李辉宇马小军冯炜张悦
- 关键词：树突细胞CD40配体
