国家杰出青年科学基金(81125003)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：曾凡一杨冠恒巩芷娟龚秀丽杨辰敏更多>>
- 相关机构：上海交通大学上海交通大学附属儿童医院上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金上海市教育委员会重点学科基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- piggyBac转座子在哺乳动物中的应用被引量：1
- 2013年
- 转座子(transposon)是存在于生物体基因组中的可移动的DNA片段,能够影响基因的结构和功能,广泛存在于生物演化过程中。转座子通过切离和粘贴机制介导外源基因的插入,是研究基因功能,制备转基因动物及基因治疗的优良载体。目前在哺乳动物中转座活性较高且研究最多的是"睡美人"转座子和piggyBac(PB)转座子。前者是目前临床前基因治疗研究中使用最为广泛的转座子,但存在剂量抑制效应和转座效率低等缺陷。而PB转座子可克服剂量抑制效应,且转座高效,转基因载量大,因此在哺乳动物中的应用越来越广泛。作者就PB转座子的作用机制、影响因素及在哺乳动物中的应用现状等进行报道。
- 杨冠恒曾凡一
- 关键词：PIGGYBAC转座子转基因
- 人羊水祖细胞的分离和基因修饰被引量：1
- 2014年
- 探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。
- 杨辰敏范书玥唐汇祥巩芷娟龚秀丽龚秀丽任兆瑞
- 关键词：血友病B人凝血因子IX基因治疗
- 外源转录因子整合对于iPSCs多能性的影响研究
- 2006年,Yamanaka等人利用逆转录病毒将Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc四个转录因子导入小鼠的成纤维细胞,成功获得了诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs...
- 尹尚
- 关键词：IPSCS多能性安全性整合位点
- 文献传递
- DNA羟甲基化酶基因Tet2激活γ珠蛋白以治疗β地中海贫血的研究被引量：2
- 2018年
- 目的为提高诱导γ珠蛋白（γ globin）基因激活的效率，研究DNA羟甲基化酶（DNA双加氧酶）基因Tet2在诱导γ珠蛋白激活表达过程中的作用，为β地中海贫血病的治疗提供理论依据。方法在人红白血病细胞系K562中用短发夹RSNA（shRNA）干扰的方法下调Tet2表达后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测干扰后细胞基因组5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）水平的变化，并用亚硫酸盐测序法检测γ珠蛋白上CG位点羟甲基化状态，最后用荧光定量实时PCR检测药物5-氮胞苷诱导γ珠蛋白激活表达量和γ珠蛋白相关转录因子Nfe4和Klf1表达量的变化。结果不做处理的对照组K562细胞基因组5hmC水平为0.14%，sh-Tet2组（Tet2下调后）约为0.03%；被5-氮胞苷激活后，Tet2下调组（即sh-Tet2＋5-氮胞苷组）γ珠蛋白的表达量为未下调组（5-氮胞苷组）的55%左右，但γ珠蛋白上CG位点的羟甲基化状态没有发现明显变化。同时，γ珠蛋白相关转录因子Nfe4和Klf1的表达量变化显著，sh-Tet2组（Tet2下调后）Nfe4为对照组的约20%，Klf1为对照组的3.5倍。结论Tet2可维持K562基因组5hmC水平，对γ珠蛋白的激活表达起到一定的调控作用，其作用机制有可能通过调控其上游转录因子来间接发挥调节作用，由此推测Tet2是一个潜在的β地中海贫血的治疗靶点。
- 李文秀马晴雯曾凡一
- 关键词：Γ珠蛋白Β地中海贫血
- TET2对γ珠蛋白表达的调控作用研究
- 人类血红蛋白是一种稳定的四聚体结构,由两条α链和两条β链组成,行使携氧的功能。其中编码某一条链的基因发生突变会导致四聚体结构遭到破坏,造成血红蛋白类疾病,如β地中海贫血正是由于β珠蛋白基因突变所导致。β珠蛋白基因簇在胚胎...
- 李文秀
- 关键词：Γ珠蛋白
- 文献传递
