河南省杰出青年科学基金(0612001600)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张改平郭军庆王丽张华王选年更多>>
- 相关机构：河南省动物免疫学重点实验室浙江大学河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：河南省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达被引量：6
- 2007年
- 将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。
- 李青梅郭军庆张改平杨艳艳王选年张华乔松林王丽
- 关键词：FC受体COS-7细胞细胞表面表达
- 牛IgG2Fc受体(boFcγ2R)胞外区基因原核表达载体的构建及其表达被引量：4
- 2008年
- 目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-TEasy,经限制性内切酶EcoRI和NotI双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得682bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段。以构建的重组质粒pET-2R转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30000的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合。结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白。为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。
- 席俊张改平何礼洋朱礼倩南楠张利娜邓瑞广李学伍
- 关键词：克隆
