国家自然科学基金(30973502)
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：中国医科大学附属第四医院中国医科大学中国医科大学附属第一医院更多>>
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- shRNA介导的Iduna沉默对肺癌A549细胞系细胞周期及其相关蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的利用shRNA沉默E3泛素连接酶Iduna基因,观察Iduna对非小细胞肺癌细胞系A549细胞周期及其相关蛋白表达的影响。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法筛选Iduna高表达细胞系。构建shRNA-Iduna真核表达载体,瞬时转染A549细胞,蛋白印迹法检测转染效率。流式细胞仪检测细胞周期变化。蛋白印迹法检测细胞周期相关蛋白的表达。结果蛋白印迹法筛选Iduna高表达细胞系显示A549和SPC细胞中Iduna mRNA和蛋白水平高于其他细胞系。shRNA-Iduna转染A549细胞系后,流式细胞仪检测细胞周期显示干扰组G0/G1期比例增加,S期比例相对减少(P<0.05)。蛋白印迹法检测与细胞周期相关的G1/S期调控蛋白[细胞周期蛋白(cyclin)A、cyclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6、P21、P27、P53等]的表达情况,结果显示干扰组cyclin D1、cyclin E和CDK4蛋白表达减少(P<0.05)。结论 Iduna可能通过调控cyclin D1、cyclin E和CDK4蛋白的表达,使细胞阻滞于G0/G1期,从而调节肺癌细胞周期进程。
- 高英李锐徐慧慧王睿惠林萍邱雪杉王恩华
- 关键词：细胞周期细胞周期蛋白类
- 非小细胞肺癌中过表达RNF146对Axin和β-catenin表达和定位的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:观察E3泛素连接酶RNF146表达对Axin和β-catenin蛋白表达的影响,探讨RNF146与Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中RNF146、Axin和β-catenin的表达。构建RNF146过表达质粒,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和细胞免疫荧光方法研究RNF146在肺癌细胞株A549和LTE中过表达对Axin和β-catenin表达及定位的影响。结果:NSCLC患者肺癌组织中RNF146高表达72例(54.1%)中49例(68.1%)显示Axin表达减弱或缺失,19例(26.4%)出现β-catenin细胞核阳性表达;RNF146低表达61例(45.9%)中只有26例(42.6%)显示Axin表达减弱或缺失,7(11.5%)例出现β-catenin细胞核阳性。RNF146与Axin的表达呈明显的负相关(P=0.003),与β-catenin的细胞核表达呈正相关(P=0.047)。肺癌细胞系中过表达RNF146能够下调Axin蛋白的表达,诱导β-catenin蛋白表达和核内分布,但对Axin和β-catenin mRNA水平没有影响。结论:RNF146可能通过Wnt/β-catenin通路参与肺癌的发生发展。
- 高英徐慧慧李锐王睿惠林萍邱雪杉王恩华
- 关键词：非小细胞肺癌E3泛素连接酶AXIN
- 新转移相关基因ATP结合盒转运子E1在非小细胞肺癌中的表达及其意义被引量：5
- 2011年
- 目的观察ATP结合盒转运子E1(ABCE1)的mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织及转移淋巴结中的表达情况,探讨其在肺癌发生、发展中的意义及其与各种临床病理参数的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应、Westernblot和免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况。结果肺癌组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达量均高于癌旁肺组织(P<0.05),且mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=3.992,P=0.001)。ABCE1蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学分级、有无淋巴结转移及pTNM分期无关(P>0.05),与病理类型有关(P=0.036),在肺腺癌中的表达高于鳞癌;ABCE1 mRNA的表达与肺癌组织学分级有关(P=0.026)。结论 ABCE1的表达可能与非小细胞肺癌的侵袭和转移相关,在肺癌的发生发展过程中起到了重要作用,并可能成为潜在的肿瘤标记物及预后指标。
- 高英徐慧慧王睿方辉薛育东刘晶玮田大力
- 关键词：非小细胞肺癌逆转录聚合酶链反应蛋白免疫印迹免疫组织化学
- 非小细胞肺癌患者放疗前后肺功能变化及其与放射性肺炎的相关性被引量：10
- 2014年
- 目的探讨适形调强放射治疗(IMRT)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺功能指标的影响,分析肺功能指标与放射性肺炎(RP)发生率、剂量体积直方图(DVH)参数与RP发生程度的关系。方法纳入未经手术首次放疗的患者52例,卡氏评分(KPS)大于或等于80分。检测IMRT前、结束时、结束第1、3个月用力肺活量(FVC),第一秒用力呼气容积(FEV1.0)和一氧化碳弥散量(DLCO)变化。观察RP发生率和程度,在DVH中得出V20、V30值。采用Spearman相关分析肺功能指标与RP发生率,V20、V30与RP发生程度的关系。结果 52例患者有49例获得随访,随访率94.20%。49例患者中,剔除2例出现肺内复发或肺转移的患者,共47例纳入最终研究。其中RP 18例,RP发生率为38.30%。第3个月,FEV1.0和DLCO均较放疗前明显下降(P<0.05),FVC无明显变化(P>0.05)。相关分析显示,FVC、FEV1.0和DLCO与RP的发生均呈正相关(r=0.451、0.405、0.635,P<0.05);另外V20、V30与RP的程度呈正相关(r=0.689、0.725,P<0.05)。结论 NSCLC V20、V30值越大,RP越严重,可作为预测RP程度的指标。
- 薛英波田大力邱冬李杭
- 关键词：辐射性肺炎适形调强放射治疗肺功能剂量体积直方图
- RNF146真核表达载体的构建及其对非小细胞肺癌细胞系生物学行为的影响
- 2014年
- 目的构建E3泛素连接酶环指蛋白146(RNF146)基因真核表达载体,研究RNF146对非小细胞肺癌细胞系体外生物学行为的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法筛选RNF146低表达细胞系。构建pEX4-RNF146真核表达载体,经酶切和测序后瞬时转染LTE细胞,荧光显微镜观察、蛋白印迹法检测转染效率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测肿瘤细胞体外增殖能力,划痕实验评价肿瘤细胞体外迁移能力,Buyden小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果酶切和基因测序证实重组质粒pEX4构建正确。MTT比色实验显示转染pEX4-RNF146组细胞增殖速度明显高于转染空载体组和未转染组(P<0.05)。划痕实验显示转染组细胞24h迁移率明显高于空载体组和未转染组(P<0.05)。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜数目明显增多(P<0.05)。结论 RNF146基因转染能促进非小细胞肺癌LTE细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,可能是一个潜在的促肿瘤增殖、侵袭和转移的相关基因。
- 高英惠林萍宋成洋徐慧慧王睿田大力邱雪杉王恩华
- 关键词：增殖
- ABCE1-GFP肺腺癌动物模型的建立及免疫组化检测被引量：1
- 2016年
- 目的:建立ABCE1-GFP(+)肺腺癌裸鼠动物模型,并进行免疫组化检测,为进一步探索ABCE1作为诊断治疗非小细胞肺癌靶点提供有用的工具。方法:应用前期实验中构建的稳定转染重组质粒p EGFPC1-ABCE1及空载体p EGFP-C1的LTEP-a-2肺腺癌细胞株,接种于裸鼠背部侧翼至腋窝皮下,建立ABCE1-GFP肺腺癌动物模型。进行成瘤情况观察,并予以倒置荧光显微镜系统呈像。取材后进行免疫组织化学检测。结果:稳转细胞系皮下接种裸鼠后,全部成瘤,过表达组肿瘤体积大于空载体及对照组(P<0.05)。过表达组肿瘤在荧光显微镜系统下可稳定表达绿色荧光,成功构建了ABCE1-GFP(+)肺腺癌皮下成瘤的裸鼠动物模型。免疫组织化学检测亦验证这一模型的确立。结论:稳定转染LTEP-a-2肺腺癌细胞可以用来成功建立皮下ABCE1-GFP(+)肺腺癌成瘤模型,是较为理想研究ABCE1在非小细胞肺癌中的基因功能的动物模型。
- 田野韩旭陈拥刘思洋姜文军田大力
- 关键词：肺腺癌动物模型免疫组化检测
- PRKACB基因真核表达载体的构建及稳转细胞株的筛选
- 2016年
- 目的:克隆人c AMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β基因(PRKACB),构建重组真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染肺癌细胞株。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人PRKACB的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因PRKACB的表达。应用新霉素(G418)筛选出稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的非小细胞肺癌细胞株。结果:测序结果证实成功将PRKACB基因克隆至真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(1 200bp)。RT-PCR及Western blot结果显示:转染后的细胞中PRKACB在转录和翻译水平的表达均有明显提高。稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的细胞株经Western blot证实其PRKACB蛋白上调最显著。结论:成功构建了真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染后上调最显著的细胞株,为进一步研究PRKACB的生物学功能奠定了基础。
- 郭剑波陈拥田大力高英
- 关键词：克隆
- ABCE1与MMP-9在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨非小细胞肺癌组织中ABCE1与MMP-9表达及其二者之间的相关性。方法:采用免疫组化和qRT-PCR技术检测30例非小细胞肺癌组织及对应的癌旁组织中ABCE1、MMP-9的表达水平,分析其在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性。结果:癌组织中ABCE1和MMP-9蛋白的表达明显高于癌旁组织。ABCE1和MMP-9 mRNA在癌组织中的表达也明显高于癌旁组织(P<0.001)。高表达ABCE1 mRNA癌组织中MMP-9 mRNA表达也较高,二者之间存在正相关(r=0.596,P=0.001)。结论:在非小细胞肺癌组织中,ABCE1基因可能通过提高MMP-9的表达从而促进了NSCLC的侵袭转移过程。
- 田治强田野吴卓田大力
- 关键词：MMP-9非小细胞肺癌
- E3泛素连接酶Iduna在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
- 2014年
- 目的 探讨E3泛素连接酶Iduna mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系.方法 应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western-Blot和免疫组织化学（EnVision）方法检测分析非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中Iduna mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理因素和预后的关系.结果 RT-PCR及Western-Blot结果显示非小细胞肺癌组织中Iduna mRNA和蛋白表达水平分别为0.468±0.086和2.554±0.544,明显高于癌旁肺组织的0.203±0.070和1.570±0.316,差异均有统计学意义（P＜0.05）;免疫组织化学结果显示：Iduna在肺泡上皮细胞中呈阴性,在正常支气管黏膜上皮中呈阴性或弱阳性,在非小细胞肺癌组织中呈不同程度的阳性表达.Iduna的高表达率与肿瘤分化程度呈负相关（P=0.002）,与肿瘤大小（P=0.044）、TNM分期（P=0.015）、淋巴结转移（P=0.009）呈正相关,并与Ⅰ期非小细胞肺癌患者的预后有关（P=0.016）.结论 Iduna的高表达可能与非小细胞肺癌的侵袭、转移过程密切相关,有可能是提示非小细胞肺癌患者预后不良的指标.
- 高英宋成洋惠林萍田野田大力邱雪杉王恩华
- 关键词：肿瘤转移预后
- 地榆升白片在Ⅱ期非小细胞肺癌术后化疗中对骨髓保护作用的研究被引量：11
- 2018年
- 目的：观察地榆生白片在Ⅱ期非小细胞肺癌术后化疗中对骨髓的保护作用。方法：回顾90例Ⅱ期非小细胞肺癌术后患者，以规律口服地榆升白片的为预防组，未口服的为对照组，观察两组化疗完成时间，骨髓抑制程度及重组人粒细胞刺激因子用量。结果：预防组4周期化疗的平均时间为（100．0±0．59）d，对照组平均时间为（118．3±1．39）d，差畀有统计学意义（P〈0．05）。重组人粒细胞刺激因子的用量预防组平均（3．04±0．15）支，对照组平均（6．03±0．29）支，差异有统计学意义（P〈0．05）。在第3周期化疗中，预防组中发生Ⅱ度以上骨髓抑制发生率为61．3％，对照组为82．1％，差异有统计学意义（P〈0．05）。在第4周期化疗中，预防组中发生Ⅱ度以上骨髓抑制发生率为74．1％，对照组为92．8％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：地榆生白片能够缩短Ⅱ期非小细胞肺癌患者术后4周期化疗的完成时间，减少重组人粒细胞刺激因子用量，降低Ⅱ度以上骨髓抑制的发生率，在Ⅱ期非小细胞肺癌患者术后化疗中起到了重要的骨髓保护作用，降低化疗风险，进而提高患者的生存期。
- 韩旭刘思洋王晴吴卓田野于潜姜文军
- 关键词：地榆升白片化疗骨髓毒性
