国家科技重大专项(2012ZX09103301-038)
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 相关作者：尚伟龙饶贤才胡珍袁文常朱军民更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学新桥医院南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响被引量：7
- 2014年
- 目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。
- 袁吉振杨杰袁文常胡珍尚伟龙张霞朱军民胡启文周人杰饶贤才
- 关键词：金黄色葡萄球菌膜泡同源重组
- 广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及耐药性分析被引量：14
- 2013年
- 目的了解广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)分子型别及其对临床常用抗生素的耐药情况,为防控MRSA感染提供依据。方法收集2010年10月至2011年4月广州地区两家教学医院临床分离的MRSA 142株,应用SCCmec、spa、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)等方法进行分子分型,检测这些菌株对苯唑西林、克林霉素等17种临床常用抗生素的药物敏感性,分析临床MRSA的耐药情况。结果 142株MRSA中121株为医院获得型金葡菌(HA-MRSA),20株为社区获得型金葡菌(CA-MRSA),1株未定型MRSA。这些MRSA可分为16种spa型,8种ST型及13种PFGE型。HA-MR-SA中的ST239-MRSA-Ⅲ-t030、ST239-MRSA-Ⅲ-t037和ST5-MRSA-Ⅱ-t002为主要流行克隆,也发现CA-MRSA中ST59-MR-SA-Ⅳ-t437克隆的流行,且这些流行克隆有特定的耐药谱。结论广州地区流行的金葡菌仍以HA-MRSA为主,同时也有一定量的CA-MRSA检出和传播,且CA-MRSA的多重药物敏感性已在下降。
- 程航曾方银胡启文袁文常周人杰张霞袁吉振尚伟龙杨杰胡珍朱军民饶贤才
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型脉冲场凝胶电泳多位点序列分型耐药谱
- 登革1型病毒GZ2002株全基因组测序与分析被引量：3
- 2012年
- 目的对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据。方法利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取R NA。根据5株登革病毒1型标准株AY145123、FJ176780、FJ176779、DVU88536、EF025110全序列设计6对相互覆盖的引物。采用R T-PCR法扩增覆盖GZ2002株基因组全长的6个cDNA片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体上,通过序列测定和重叠序列拼接获得全基因组序列。结果 GZ2002株基因组全长10 735 nt,单一阅读框长10 176 nt,推测编码3 392个氨基酸,5'及3'-UTR分别为94 nt和462 nt,无显著的密码子偏嗜性。GenBank登录号:JN205310。系统进化分析显示GZ2002株属于DENV-1型基因IV型。比较不同致病性的DENV-1型毒株发现,随DENV毒株致病力的增强,编码区氨基酸突变位点明显增多。GZ2002株、泰国16007株、柬埔寨株及印度尼西亚98901530株的5'-UTR二级结构高度保守,3'-UTR分析显示强毒力泰国16007株与柬埔寨株均存在高突变区。结论 GZ2002株属于DENV-1型基因IV型,可能与1998年印度尼西亚DENV-1流行株相关,编码区株特有氨基酸变异位点及3'-UTR高突变区的生物学意义值得进一步探讨。
- 方昕胡珍张俊磊朱军民陈炜尚伟龙袁文常程航黎庶胡晓梅饶贤才
- 关键词：全基因组测序
- 重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行克隆更替的机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。
- 尚伟龙胡启文胡珍朱军民杨杰袁文常程航袁吉振张霞饶青饶贤才
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌利福平耐药
- 登革病毒感染人原代树突状细胞(CD209,-139A/-336A)模型的建立
- 2017年
- 目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DCs的形态,流式细胞术鉴定DCs的分化效率,淋巴细胞增殖实验鉴定DCs的生物学功能。以I型登革病毒GZ2002株为模式病毒进行病毒感染实验,建立并评估以人原代DCs为宿主的登革病毒感染模型。结果分离获得的DCs前体细胞经细胞因子刺激后成功分化为未成熟DCs,分化效率高达90%。获得的DCs具有典型的细胞形态及生物学功能,可有效刺激淋巴细胞增殖。登革病毒GZ2002株能成功感染诱导获得的原代DCs,促进DCs成熟,并复制产生感染性子代病毒,证明细胞感染模型成功建立。结论成功建立以DCs为宿主的登革病毒感染模型。
- 杨裔方昕胡珍杨杰袁吉振尚伟龙饶贤才
- 关键词：登革病毒树突状细胞细胞模型
