中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0032007008)
- 作品数：16 被引量：73H指数：6
- 相关作者：李刚史利军范晓娟李伟张锦秀更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所吉林大学兰州军区兰州总医院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划北京市科委基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型免疫抑制机理研究进展被引量：15
- 2009年
- 猪圆环病毒2型(PCV-2)致病的一个主要原因是使感染的个体产生免疫抑制,感染猪体免疫细胞受到不同程度的损伤。PCV-2可以在单核细胞、巨噬细胞等抗原递呈细胞中存在,影响这些细胞对于抗原的递呈。PCV-2也可在T淋巴细胞及B淋巴细胞中增殖,引起机体体液免疫及细胞免疫反应能力的下降。调节免疫的各种细胞因子在感染PCV-2后也有一定程度的改变,PCV-2感染可引起IL-10分泌的增加,PCV-2与猪天然干扰素分泌细胞相互作用,可使这些细胞分泌干扰素的能力下降。PCV-2造成免疫抑制也与病毒ORF3分泌的功能蛋白有一定的关系,ORF3可诱导免疫细胞凋亡,主要是激活caspase-8途径而不是caspase-9途径。
- 史利军任林柱李刚
- 关键词：猪圆环病毒2型生物学特性免疫抑制机理
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤堆素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒2型胶体金免疫层析抗体检测葡萄球菌蛋白A
- 文献传递
- 犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coli Rosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化。结果表明纯化样品中含有87kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带。E.coli Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础。
- 张坤马丽娟李刚黄伟李伟贾凤琴
- 关键词：犬细小病毒原核表达纯化
- 减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析
- 2010年
- 根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性.
- 董春娜李刚邱文英张坤哈小琴
- 关键词：减蛋综合征病毒基因组同源性
- 猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用被引量：7
- 2011年
- 以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。
- 胡小华李刚史利军张坤贾凤芹
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒
- 猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用被引量：3
- 2009年
- 本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV2抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶160,最佳封闭试剂为10%牛血清,二抗的使用浓度为1∶1000,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应条件为37℃反应10 min,cutoff值为0.25。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。与标准的检测试剂盒相比,检测临床样本时,本检测方法与对照试剂盒检测结果符合率为91.7%。结果表明,建立的检测方法可用于临床PCV2抗体的检测。
- 史利军张锦秀任林柱李刚
- 关键词：猪圆环病毒2型核衣壳蛋白间接酶联免疫吸附试验
- 减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测.
- 董春娜李刚李伟张坤史利军哈小琴胡永浩
- 关键词：减蛋综合征病毒环介导等温扩增
- 猪圆环病毒Ⅱ型修饰Cap蛋白基因的原核表达及纯化
- 目的:本研究基于原核表达系统表达猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)Cap蛋白.方法:PCV-2 ORF2基因编码的Cap蛋白含有能产生免疫反应的多个抗原表位,本研究针对Cap蛋白基因设计引物,去掉核定位信号肽的核苷酸序列克隆到...
- 张锦秀晁生玉史利军候绍华李刚
- 关键词：核衣壳蛋白纯化
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型修饰Cap蛋白基因的原核表达及纯化
- 2009年
- 目的:本研究基于原核表达系统表达猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)Cap蛋白。方法:PCV-2ORF2基因编码的Cap蛋白含有能产生免疫反应的多个抗原表位,本研究针对Cap蛋白基因设计引物,去掉核定位信号肽的核苷酸序列克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,筛选重组菌并进行原核表达、鉴定及纯化。结果:纯化后的修饰Cap蛋白是能够与猪圆环病毒Ⅱ型的阳性血清发生特异性反应。结论:表达的重组修饰Cap蛋白可以作为标准抗原蛋白用于PCV-2的检测。
- 张锦秀晁生玉史利军候绍华李刚
- 关键词：核衣壳蛋白纯化
- 狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用被引量：2
- 2011年
- 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。
- 范晓娟李刚李伟曾妮宫苗苗
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统
