中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0032007012)
- 作品数：13 被引量：85H指数：6
- 相关作者：贾万忠付宝权闫鸿斌李文卉王艳华更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所西北民族大学兰州大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划甘肃省科技重大专项计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2010年
- 根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。
- 盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权
- 关键词：旋毛虫重组蛋白抗原性
- 甘肃兰州地区屠宰市场兔球虫病流行病学调查被引量：20
- 2009年
- 兔球虫病是由艾美耳科球虫引起的一种原虫病,对养兔业危害较大。本研究对甘肃省兰州市5个菜市场屠宰兔的球虫感染情况进行了调查,并鉴定出感染球虫的种类,为虫种的分离和球虫病的防治提供了依据。
- 马永华贾万忠闫鸿斌田广孚陈士恩
- 关键词：球虫病流行病学
- 带属绦虫线粒体基因组全序列分析
- 囊尾蚴病(脑多头蚴病)是一类重要的人兽共患寄生虫痛,在我国普遍流行。目前,已完成包括猪带绦虫(T.solium,Tso)、牛带绦虫(T.saginata,Tsa)、亚洲带绦虫(T.asiatica,Tas)、多头绦虫(T...
- 贾万忠闫鸿斌王玉朝郭爱疆詹芳付宝权施万贵田广孚才学鹏
- 关键词：线粒体基因组进化树遗传学
- 文献传递
- 细胞内模式识别受体研究进展被引量：14
- 2008年
- 天然免疫系统要依赖模式识别受体识别入侵的外源病原微生物,然后将其清除。哺乳动物主要具有两类微生物识别系统,一类是膜结合受体,如Toll样受体,可识别胞外微生物,然后活化细胞内信号来激发机体的免疫反应;另一类是细胞内的模式识别受体,包括NOD样受体和具有螺旋酶结构域的抗病毒蛋白RIG-1和MDA5。这些胞浆分子可识别病原微生物、非微生物以及一些危险信号,在机体的健康与疾病中发挥着十分重要的作用。本文就细胞内天然免疫受体的种类和功能作一综述。
- 闫鸿斌高闪电贾万忠才学鹏
- 关键词：天然免疫NOD样受体
- 重组CE18蛋白在绵羊绦虫蚴病诊断上的应用被引量：6
- 2009年
- 【目的】探讨细粒棘球蚴CE18重组蛋白作为绦虫蚴病免疫诊断抗原的应用价值,为筛选绦虫蚴病血清学诊断抗原提供依据。【方法】应用棘球蚴CE18重组抗原建立间接ELISA方法,分别对18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、19份棘球蚴感染绵羊血清及194份棘球蚴病疫区绵羊血清和13份健康羊血清进行检测,通过显著性差异分析评价CE18蛋白作为诊断抗原的意义。同时,应用生物学软件对CE18抗原蛋白同源序列进行分析,进一步从分子水平上提示CE18蛋白作为绦虫蚴病诊断抗原的依据。【结果】序列分析表明棘球蚴CE18蛋白基因为多种绦虫如泡状带绦虫、多头带绦虫、猪带绦虫等的共有序列,其蛋白质氨基酸序列相似性很高,不同种属之间高达99%,从分子水平上表明CE18蛋白为带绦虫蚴共同抗原成分之一。重组抗原CE18-ELISA方法检测绵羊血清抗体水平显示:脑多头蚴病、细颈囊尾蚴病、棘球蚴病和棘球蚴病疫区血清的阳性率分别为38.89%、73.33%、100%和76.14%,而对照组血清为阴性反应。【结论】CE18重组蛋白可作为绵羊棘球蚴病和细颈囊尾蚴病血清学诊断抗原,用于畜群活体检疫初筛试验。
- 刘红霞才学鹏张少华郭爱疆闫鸿斌苟惠天付宝权贾万忠
- 关键词：绵羊抗体免疫诊断
- 细粒棘球绦虫TPx基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2008年
- 从自然感染病羊肝内收集细粒棘球绦虫(Eg)原头蚴,分别提取总RNA和基因组DNA。根据GenBank数据库中的细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因序列设计1对引物,以总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出EgTPx基因片段,同时以基因组DNA为模板扩增出对应的基因组序列。PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析。结果表明,成功扩增到中国青海株细粒棘球绦虫EgTPx基因片段,其开放阅读框为582 bp,编码193个氨基酸,与已知的EgTPx基因核苷酸序列及其编码蛋白氨基酸序列的同源性均为99%,有3个碱基发生变异,分别在245,306,318位由C变为T;引起1个氨基酸变异,由Ala82变为Val82。EgTPx具有典型的2-Cys型过氧化物氧还蛋白催化性位点Cys48和Cys169,以及周围保守的FVCP和VCPA序列。EgTPx基因的开放阅读框对应的基因组序列包含2个外显子和1个69 bp的内含子。
- 李航李文卉苟惠天李永光王艳华张德林贾万忠史大中付宝权
- 关键词：细粒棘球绦虫基因克隆
- 细粒棘球绦虫重组EG95抗原在绵羊绦虫蚴病血清抗体检测中的应用被引量：5
- 2012年
- 为了分析评价细粒棘球绦虫重组蛋白EG95(rEG95)在血清抗体检测上的效果,以细粒棘球绦虫EG95重组质粒pGEM-EG95为模板,经PCR扩增后将目的片段亚克隆至pET-28a(+),构建重组表达载体pET-EG95,在大肠杆菌BL21中表达,SDS-PAGE分离和电洗脱纯化重组表达产物rEG95。建立重组蛋白间接ELISA方法,检测绵羊带绦虫蚴病血清抗体水平。结果表明,表达产物经SDS-PAGE测定分子质量为21ku左右。该蛋白可被棘球蚴病阳性血清特异性识别,表明该表达产物具有反应原性。应用该重组蛋白间接ELISA检测18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、20份棘球蚴感染绵羊血清,24份疫苗抗原rEG95免疫羊血清和来自棘球蚴病疫区的179份绵羊血清,其阳性检出率分别是66.67%、80.00%、100%、91.67%和58.2%,而14份健康羊血清反应为阴性,组间差异有一定统计学意义(P<0.05)。表明EG95蛋白可作为绵羊带绦虫蚴病共同保护性抗原和诊断抗原而加以应用。
- 刘红霞张德祯闫鸿斌娄忠子倪兴维苟惠天贾万忠
- 关键词：细粒棘球绦虫血清抗体酶联免疫吸附试验
- 旋毛虫TsP53重组蛋白对小鼠的免疫保护性被引量：1
- 2010年
- 将旋毛虫TsP53重组蛋白以20μg/只的剂量免疫小鼠3次后攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只。检查小鼠肠道旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数和感染35d后的肌幼虫数,并计算减虫率,同时用间接ELISA检测血清中抗TsP53重组蛋白的抗体应答。结果显示,TsP53重组蛋白免疫小鼠旋毛虫7日龄成虫、雌虫产新生幼虫的减虫率分别为14.34%和16.93%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异不显著(P>0.05);感染35d后肌幼虫减虫率为38.68%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异显著(P<0.05)。TsP53重组蛋白免疫小鼠在首次免疫后第7天出现抗体应答,可检测到抗TsP53重组蛋白的抗体,第3次免疫后第7天达到峰值,攻击感染后略有下降,但直到试验结束时仍然维持在较高水平,TsP53重组蛋白可诱导小鼠产生部分抗旋毛虫的免疫保护性。
- 王鸿盛李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚王艳华张德林薛慧文付宝权
- 关键词：旋毛虫重组蛋白免疫保护性
- 人体带绦虫病诊断方法的研究进展被引量：7
- 2010年
- 就目前用于人体带绦虫感染或寄生的常用临床诊断方法,如虫体形态学观察、粪便或肛门拭子涂片显微镜检查、循环抗体ELISA检测、粪抗原ELISA和粪DNA-PCR检测等及其优缺点进行了综述。指出,敏感性高且特异性强的粪抗原ELISA和粪DNA分子生物学检测是今后的发展方向和应重点研究的领域。
- 贾万忠王玉朝闫鸿斌郭爱疆
- 关键词：带绦虫病
- 兔斯氏艾美耳球虫毒性研究被引量：10
- 2010年
- 本文对采自山东的兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)卵囊做毒性研究。主要研究了不同攻虫剂量兔斯氏艾美耳球虫对不同月龄兔的毒害作用。同时,研究了酶联免疫吸附试验(间接法)检测兔斯氏艾美耳球虫抗体的最适反应条件和在毒理学实验中的应用,并对攻虫后的各项检测指标结果做详细的比较。对兔斯氏艾美耳球虫致病性研究发现成年兔感染兔斯氏艾美耳球虫通常无明显的临床症状,而幼兔感染时则较为严重;人工感染试验结果发现,在一定的数量范围内,宿主吞食的卵囊数增加,随之疾病的严重性也增加;从特异性抗体的变化情况来看,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的抗体效价明显高于空白对照Ⅵ组,且随着感染时间的增长,抗体水平也明显增高。本试验结果为兔斯氏艾美耳球虫疫苗的研制提供理论依据。
- 陈士恩马永华贾万忠闫鸿斌田广孚
- 关键词：斯氏艾美耳球虫毒理学酶联免疫吸附试验
