湖北省教育厅科学技术研究项目(T201212)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞G_0S_2mRNA表达的影响
- 2014年
- 目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 mRNA表达影响的时效关系和量效关系;运用不同细胞信号通路阻断剂处理,研究PDGF-BB影响G0S2 mRNA表达的信号途径;转染含有G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-G0S2-Promotor,检测PDGF-BB对G0S2基因启动子活性的影响。结果:PDGF-BB能够增加平滑肌细胞G0S2 mRNA表达,PDGF-BB诱导VSMC表达G0S2mRNA在12h后达峰值[20ng/ml增加(2.83±0.81)倍;10ng/ml增加(2.99±0.12)倍,P<0.05],随后降低。p38MAPK和PI3K/AKT信号通路阻断剂可显著抑制PDGF-BB诱导的G0S2mRNA表达(P<0.05),并且PI3K/AKT信号通路阻断剂可以明显降低G0S2 mRNA的基础表达水平。荧光素酶活性分析显示,PDGF-BB可增强G0S2基因启动子活性(P<0.05)。结论:PDGF-BB上调VSMC中G0S2基因mRNA的表达,并且可以增强G0S2基因启动子活性,p38MAPK和PI3K/AKT通路可能介导了这种作用。
- 张翠珍蒋学俊钱航张鹏杨汉东
- 关键词：血小板源性生长因子血管平滑肌细胞细胞增殖
- 含G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因载体的构建被引量：2
- 2014年
- 目的:克隆人G0S2基因启动子并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究G0S2基因转录调控提供质粒。方法:利用PCR技术从人胚肾293A细胞基因组DNA中克隆获得G0S2基因启动子的DNA片段,将其克隆至pGL3-basic表达载体中,并转化人大肠杆菌DH5α,经限制性内切酶酶切、PCR及测序鉴定得到确认;将重组载体质粒与半乳糖苷酶表达质粒psV-β-Galactosidase共转染至大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),检测细胞中荧光素酶的活性。结果:pGL3-G0S2-Promoter重组质粒插入片段和相邻序列正确,克隆的G0S2基因片段有启动子活性(P<0.05)。结论:成功构建了pGL3-G0S2-Promoter报告基因质粒,为进一步研究G0S2基因的表达奠定了基础。
- 张翠珍蒋学俊钱航张鹏杨汉东
- 关键词：启动子荧光素酶
