国家自然科学基金(30780049)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：方宏清周长林戴红梅孙旭李树龙更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国药科大学北京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学医药卫生更多>>
- 通过染色体整合表达古菌乙酰化酶合成N-末端乙酰化胸腺肽β4被引量：2
- 2011年
- 胸腺肽β4(Tβ4)是N-末端乙酰化的43肽,具有多种重要生物学功能.其生物合成存在两大难点,即乙酰化修饰和小分子肽的表达.本研究发现来自古菌Sulfolobus solfataricus的乙酰化酶ssArd1可以催化Tβ4的N-末端乙酰化修饰.利用Red同源重组技术将ssArd1基因表达盒整合至E.coli BL21(DE3)染色体的lpxM位点上,构建了可以实现Tβ4N-末端乙酰化修饰的新型宿主E.coli BDA.将Tβ4编码基因融合在改造的微型Spl DnaX Intein的N端,并在Intein的C端添加His标签,构建了表达载体pET-Tβ4-Intein.在E.coli BDA中表达的融合蛋白,经镍亲和层析纯化后用β-巯基乙醇诱导融合蛋白切割释放小分子多肽,获得了具有N-末端乙酰化的Tβ4.
- 曹赛戴红梅孙旭颛孙丹丹和金周司信喜李树龙方宏清陈惠鹏谢达平周长林
- 关键词：乙酰化酶INTEIN
- 发酵液中莽草酸分离纯化的工艺研究被引量：2
- 2013年
- 为了有效提取基因工程菌DHPYAAS-T7发酵液中的莽草酸,文章采用了离子交换色谱法对发酵液中莽草酸进行分离纯化。包括发酵液的预处理、离子交换树脂的选择、动态吸附、洗脱、脱色、脱盐以及纯度检测等过程。研究结果表明,所选的4种树脂中,717型强碱性阴离子交换树脂的吸附容量最大,发酵液的浓缩上样浓度为6.46 g/L。当调节发酵液pH值为6.0时,莽草酸成完全解离状态,能被树脂完全吸附。以1.0 mol/L的NH4Cl溶液洗脱,莽草酸回收率为91.7%。以HZ-816大孔吸附树脂进行脱色,莽草酸回收率为98.8%。以732型强酸性阳离子交换树脂进行脱盐,回收率为98.3%。将得到的莽草酸溶液进行结晶,HPLC检测纯度,晶体纯度达到98.6%。该工艺能有效的从发酵液中分离纯化高纯度的莽草酸,为莽草酸生产工业化奠定了基础。
- 王慧袁超陈凯窦洁方宏清周长林
- 关键词：莽草酸发酵液离子交换纯化
- 基于PTS缺陷型大肠杆菌构建莽草酸生产菌被引量：6
- 2011年
- 对大肠杆菌芳香族氨基酸合成途径进行代谢流改造,以实现高效的生物制备莽草酸。以磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)敲除菌DH5α△ptsHIcrr(DHP)为基础,特异性敲除aroL、ydiB基因并转入受阿拉伯糖诱导表达的T7-RNA聚合酶基因,最终构建一系列产莽草酸宿主菌。再将aroE、aroB、tktA、glk、aroFfbr组成的系列基因串联起来置于质粒上,在T7启动子控制下表达,经摇瓶培养检测得知,不同重组菌产莽草酸能力与对照相比均有明显提高,其中DHPYA-T7/pAOC-TGEFB菌株产量最高,可达到392 mg/L。为进一步构建高表达莽草酸工程菌奠定基础。
- 邹永康周军智孙旭蔡亚非戴红梅李树龙周长林方宏清
- 关键词：莽草酸
- 应用基因组工程构建新型大肠杆菌细胞工厂
- 2011年
- 基因组工程(genome engineering)是指为了实现某一目标对复制系统进行有意地、广泛地遗传修饰。大肠杆菌作为常用细胞工厂之一,在生物制造领域应用广泛,已成为合成生物学的主要研究对象。应用基因组工程改造大肠杆菌可以进一步拓展其应用范围。介绍了基因组工程最新技术发展,如基因组整合、染色体进化、多元自动化基因组工程、可寻迹多元重组工程等,及其在改造大肠杆菌提高其生产能力、稳定性及环境耐受能力等方面的研究进展。
- 蔡钒方宏清陈必链
- 关键词：细胞工厂大肠杆菌基因组工程合成生物学
