黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11521023)
- 作品数：2 被引量：28H指数：1
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- 相关机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学更多>>
- 野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及功能分析被引量：27
- 2008年
- 干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害,它可以使作物减产,甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源,是基因克隆的理想材料。从低温(4℃)、干旱(30%PEG)及盐胁迫(200mmolL-1NaCl)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,并以此链为模板,从已构建的盐胁迫全长cDNA文库和东北野生大豆盐胁迫EST数据库中筛选出与渗透胁迫直接相关的EST序列,根据该序列设计一对PCR引物扩增S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的全长序列,经Blast比较分析,确定所获得的SAMS基因全长序列。构建以pBI121为基础的CaMV35S启动子调控的植物表达载体;利用农杆菌介导法将其导入烟草,获得了180株转基因烟草,并进行了低温、干旱和盐胁迫处理,通过测定在不同胁迫处理下的生理指标,分析了基因的功能。野生大豆的SAMS基因在烟草中的超量表达提高了转基因烟草的抗低温、干旱和耐盐能力。
- 樊金萍柏锡李勇纪巍王希才华朱延明
- 关键词：野生大豆SAM合成酶基因克隆功能分析
- 野生大豆SAMS同源基因的克隆及分析被引量：1
- 2008年
- 硫腺苷甲硫氨酸作为甲基供体在转甲基反应中起到重要作用。从低温(4℃)、高盐(200 mmol/L NaCl)及干旱(30%PEG)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,应用已知的EST序列设计一对PCR引物扩增SAM合成酶基因的全长序列,最后经BLAST比较分析,确定所获得的SAMS基因序列完整性。所得序列长1185 bp,具有完整的开放读码框,编码394个氨基酸,与棉豆和苜蓿的SAM合成酶基因的核苷酸序列的同源性分别为89%、85%。构建了以pET-32b为基础的原核表达载体并进行原核表达分析,分析SAMS基因的表达情况。为后续的抗逆性功能验证奠定基础。
- 樊金萍柏锡李勇纪巍王希朱延明
- 关键词：野生大豆SAM合成酶基因克隆原核表达
