家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(SKLVEB2013KFKT005)
- 作品数：5 被引量：10H指数：3
- 相关作者：郑葵阳颜超张波汤仁仙张蓓蓓更多>>
- 相关机构：徐州医学院徐州医科大学更多>>
- 发文基金：家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究被引量：4
- 2016年
- 为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P<0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。
- 张蓓蓓张波沈莉萍李波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫肝脏病理变化
- 华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究
- 2017年
- 目的观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用。方法体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量。结果与PBS组相比,ESPs刺激组Tbet、GATA3mRNA表达水平升高(P<0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P<0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P<0.05),IL-4无明显变化。结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答。
- 张波张蓓蓓程晓丹华慧于倩颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫DC细胞CD4+细胞成虫抗原
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- 小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定被引量：1
- 2015年
- 为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。
- 王艳红张波李波张蓓蓓于倩颜超华慧汤仁仙郑葵阳
- 关键词：小鼠肝内胆管上皮细胞
- 华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1和白细胞介素17的动态变化及其意义被引量：3
- 2014年
- 目的分析华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的变化及意义。方法选择健康新西兰兔8只,经口灌胃华支睾吸虫囊蚴800个;于感染0、1、3、7、14、21、28和42d耳缘静脉采血,分离血清,用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-17水平;于42d剖杀感染兔,取肝脏制作组织切片,HE染色观察病理变化。结果实验兔感染0d时TGF-β1为(706.08±60.72)pg/ml,感染42d时为(1106.26±60.35)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17水平自感染开始持续增高,在感染3d时[(68.69±6.04)pg/ml]达到最高峰,与感染0d[(50.04±4.16)pg/ml]时相比,差异有统计学意义(P<0.05);此后逐渐降低,至21d时降至感染前水平。结论新西兰兔感染华支睾吸虫早期IL-17高表达,感染42d时TGF-β1高表达。提示TGF-β1/IL-17在华支睾吸虫致病过程中发挥重要作用。
- 华慧徐江涛张波颜超李向阳刘瀛刘转转付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫新西兰兔IL-17
