国家自然科学基金(30470653)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因被引量：2
- 2009年
- 采用抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)方法,构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减cDNA文库,以期筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA,反转录成cDNA,以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester),以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(driver),经过2轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法,进一步验证了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序,对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较,大部分片段都可以检索到同源序列。结果显示,cPGES/p23等13个基因热激后表达量上调;septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。
- 曹慧仁杨永杰杜一王登宇孔维华
- 关键词：小鼠睾丸组织差减CDNA文库
