国家高技术研究发展计划(SS2012AA020905)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杨鹏辉王希良周娅段跃强张良艳更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第302医院宁夏医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型H7N9流感裂解疫苗制备及免疫保护效果的评价被引量：2
- 2014年
- 目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8)毒株的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因进行重配,转染细胞后筛选拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株,制备rgPR8-H7N9流感裂解疫苗抗原。腹腔注射免疫Balb/c小鼠,检测血清IgG、IgG1、IgG2a、HI效价,进一步用野生株攻毒,评价rgPR8-H7N9流感裂解疫苗的免疫保护效果。结果成功拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9。制备的重配甲型H7N9流感裂解疫苗对小鼠产生较高的HI抗体效价。IgG1/IgG2a亚型检测结果表明小鼠体内以诱导体液免疫为主。攻毒实验显示甲型H7N9流感裂解疫苗能够有效降低肺部的病毒载量,肺组织病变显著减轻、体质量下降后趋于稳定,疫苗剂量达到15μg即可全部存活。A/Anhui/1/2013(H7N9)野生株流感病毒攻毒,甲型H7N9流感裂解疫苗能够达到保护小鼠效果。结论成功拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9,制备的甲型H7N9流感裂解疫苗具有较好的免疫原性及免疫保护性,为H7N9流感裂解疫苗的研发及进入临床研究提供了实验依据。
- 陈锐段跃强赵忠鹏张良艳邢丽刘娜张立周娅王希良杨鹏辉
- 关键词：反向遗传学裂解疫苗免疫保护性
- 基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。
- 王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉
- 关键词：NPM1HSP60流感病毒
- 呼吸道合胞病毒的分离鉴定及其致病力的初步评价被引量：3
- 2015年
- 目的分离鉴定临床呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),评价其致病力,为疫苗评价及致病机制的研究提供实验材料。方法收集临床呼吸道感染重症患儿的鼻咽分泌物样本进行RT-PCR初步鉴定,通过病毒培养,空斑纯化,电镜观察及病毒滴度测定,筛选出1株呼吸道合胞病毒候选株,经全基因组测序后命名为BJ016。选用14日龄C57乳鼠,每组26只,采用BJ016为实验组,PBS为对照组,分别对小鼠滴鼻感染,30μl/只。连续14日监测2组小鼠体质量变化及死亡率,肺组织的病毒载量、湿干比,HE染色观察肺病理变化并计数炎性细胞总量,同时采用CBA测定血清中细胞因子的变化。结果 100份临床呼吸道感染重症患儿鼻咽分泌物样本中,RT-PCR鉴定为RSV A亚型阳性共21例,经病毒分离培养、空斑纯化、电镜观察及RT-PCR鉴定后得到16株RSV临床分离株,通过TCID50测定病毒滴度筛选出1株滴度为106.5TCID50/ml的候选株,基因组序列分析显示其为NA1基因型,命名为BJ016。BJ016感染14日龄C57乳鼠后造成肺损伤,在第5日达到发病高峰时测定病载、湿干比、病理检测并计数炎性细胞,实验组较对照组具有明显统计学差异,血清中MCP-1、IL-6、G-CSF及MIP-1α均显著性升高。结论成功分离出1株能致死14日龄C57乳鼠的RSV病毒株并初步评价了其致病力,为疫苗评价及RSV致病机制的研究提供了良好的实验材料。
- 朱萍谷宏静谢正德周娅杨鹏辉王希良
- 关键词：RSV病毒分离致病力
