国家科技重大专项(2009ZX09103-614)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王晨宇贾培媛赵宇刘晶王玉霞更多>>
- 相关机构：北京军区总医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白被引量：2
- 2011年
- 目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段。方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度。结果利用亲和层析纯化的3P40,进行HRP标记,ELISA检测3P40HRP滴度可达1∶200 000;建立的竞争性ELISA方法可以检测PBST中P53蛋白,灵敏度达30 ng/ml,日内精密度较高,相对标准偏差(RSD)小于5%,体现较好的重复性;分别应用正常小鼠血清、PBST稀释的重组P53蛋白样品进行竞争性ELISA检测,结果显示小鼠血清成分对P53蛋白检测有一定的影响;应用血清制备P53蛋白的标准曲线,检测了腹腔注射P53蛋白后不同时间点小鼠血清样品中的P53蛋白浓度。结论进行了抗P53单克隆抗体3P40的HRP标记,建立了竞争性ELISA方法,可用于P53蛋白药物血药浓度检测。
- 武军华魏文清贾培媛王晨宇赵宇刘晶黄春倩王玉霞
- 关键词：P53蛋白单克隆抗体酶联免疫吸附分析
- 肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析被引量：3
- 2011年
- 目的制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体。方法应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白;ELISA测定抗体滴度。纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231〔p53(mutant)〕和〔H1299,p53(null)〕肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性。结果对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化。SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上;ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上。免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng。Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合。结论成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳。
- 武军华魏文清贾培媛赵宇王晨宇刘晶王玉霞
- 关键词：肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体酶联免疫吸附分析
