国家科技重大专项(2009ZX09103-603)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 组织型纤溶酶原激活剂突变体瑞替普酶的原核表达、活性鉴定及酶动力学
- 目的重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法构建pBV220-t-PA重组表达质粒,经DNA测序...
- 李飞朱美财占志马红雨蔡庆
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物酶类
- 文献传递
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体瑞替普酶的原核表达、活性鉴定及酶动力学被引量：3
- 2013年
- 目的重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法构建pBV220-t-PA重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5α,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性。结果经测序t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30%,经纯化后纯度>95%,比活性为4.2×108 IU.g-1,t-PA突变体与PAI-1反应后其活性未受到抑制。t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.3298μmol·L-1,最大水解速度Vmax为0.0476μmo·lmin-1.g-1。结论 t-PA突变体能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性。
- 李飞朱美财占志马红雨蔡庆
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物酶类
- 抗PAI抑制作用的纤溶酶原激活剂突变体的活性研究
- 2014年
- 目的:重组表达抗PAI抑制作用的t-PA突变体,经诱导表达、复性、纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法:构建pBV220-tpa重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5a,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性。结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30%,经纯化后纯度达90%以上,比活性为7.0×108IU/mg,t-PA突变体与PAI-1反应后,其活性未受到抑制。t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.5298,最大水解速度Vmax为0.0595。结论:经生物学活性测定,表达蛋白能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性,该突变体有可能成为用量更少、疗效更佳的新型溶栓药物。
- 李飞李忠培占志王冬雪朱美财
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体蛋白表达酶动力学
