国家自然科学基金(30570886)
- 作品数：26 被引量：113H指数：6
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- 抵抗素对内皮细胞胰岛素信号通路的影响
- 2009年
- 目的：研究抵抗素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）胰岛素信号通路的影响。方法：原代培养HUVECs，以不同水平人抵抗素（0～100μg／L）培养24h。用免疫印迹法检测其对经胰岛素作用的内皮细胞的磷酸化蛋白激酶B（phospho-protein kinase B，p-PKB）及磷酸化内皮型一氧化氮合酶（phospho-endothelial nitric oxide synthase，p-eNOS）水平，并对检测结果进行分析。结果：与无加抵抗素的对照组比较，抵抗素干预HUVECs 24h后，胰岛素刺激状态下的p-PKB和p-eNOS水平均明显降低（P〈0．05～0．01）；基础状态下，抵抗素作用下HUVECs的p-PKB水平无明显改变（均为P〉0．05），而p-eNOS水平明显降低（P〈0．05）：结论：抵抗素对内皮细胞的胰岛素信号转导和内皮型一氧化氮合酶磷酸化可起抑制作用，这可能是抵抗素诱导内皮细胞功能异常的机制之一。
- 李志臻李芳萍叶建红严励傅祖植
- 关键词：抵抗素内皮细胞胰岛素信号转导一氧化氮合酶
- 抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被引量：1
- 2007年
- 【目的】构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA,A/T克隆于pGEM-T载体,再亚克隆于pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)真核表达载体,构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-resistin和pcDNA3.1(-)-resistin(-)。将pcDNA3.1(-)-resistin(-)转染小鼠3T3-L1脂肪细胞,通过G418筛选稳定表达的细胞株。3T3-L1脂肪细胞分为对照、瞬时、载体和稳定4个细胞组(每组n=6),用3H-2-脱氧葡萄糖进行非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取试验。【结果】插入pcDNA3.1(+)的DNA片段的核苷酸序列与小鼠抵抗素基因mRNA编码区序列完全一致,且方向正确;插入pcDNA3.1(-)的DNA片段的核苷酸序列与抵抗素基因mRNA编码区核苷酸序列完全一致,且方向相反。对照组、瞬时组、载体组和稳定组的3T3-L1脂肪细胞非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取率的无显著性差别(P>0.05)。【结论】成功构建了载有抵抗素基因和载有抵抗素基因反义核酸的重组真核表达质粒。抵抗素对3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取均无明显影响。
- 李芳萍李焱傅玉如严励傅祖植
- 关键词：抵抗素脂肪细胞葡萄糖摄取
- 实时FQ-PCR检测冠心病患者抵抗素基因的表达被引量：1
- 2009年
- 目的：建立人抵抗素（Resistin）mRNA荧光定量检测方法,并比较急性冠脉综合征（Acute coronary syndrome,ACS）[急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction,AMI）、不稳定性心绞痛（Unstable Angina Pectoris,UAP）]、稳定性心绞痛（Stable Angina Pectoris,AP）患者和健康体检者外周血单个核细胞（PBMC）中的Resistin基因表达水平差异。方法：基于Taqman荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-resistin作为定量模板,在ABI-7000型PCR仪上通过荧光强度达到一定阈值时循环数来定量模板,以建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法,并对21例AMI、19例UAP、19例AP患者和22例健康体检者外周血Resistin mRNA进行检测。实验同时检测血清超敏C反应蛋白（hsCRP）的浓度。结果：Resistin标准曲线范围为10^3-10^8拷贝/μl（r=0.993）,内参三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）标准曲线范围为10^3-10^8拷贝/μl（r=0.998）。AMI组、UAP组外周血PBMC中的Resistin mRNA表达显著高于健康体检组（P〈0.01）,AMI组高于UAP组（P〈0.01）,UAP组高于AP组（P〈0.05）。AMI组、UAP组、AP组resistin mRNA与hsCRP呈正相关（相关系数分别为0.895、0.877及0.592,P〈0.01）。结论：成功建立人Resistin mRNA表达的FQ-PCR检测方法。Resistin mRNA表达水平与心肌损害程度及炎症标志物有关,Resistin可能作为炎症因子参与了冠心病动脉粥样硬化的发生发展。
- 罗招凡雷娟李芳萍程桦
- 关键词：抵抗素聚合酶链反应单个核细胞
- 抵抗素对内皮细胞活性氧生成及AMPK磷酸化水平的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨抵抗素对内皮细胞功能影响的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,50、100 ng/ml抵抗素干预24 h,分别检测活性氧(ROS)生成和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平,并应用AICAR激活AMPK观察其对内皮ROS生成的影响。结果50、100 ng/ml抵抗素作用组与对照组相比,内皮细胞AMPK磷酸化水平明显下降,而ROS生成无明显改变;50 ng/ml抵抗素作用组加用AICAR干预后,AMPK磷酸化水平显著增高,同时伴ROS生成显著降低。结论抵抗素可影响内皮细胞功能,其机制可能通过抑制内皮细胞AMPK的磷酸化水平,参与内皮细胞炎症过程的调节,激活内皮AMPK,减少ROS生成,对内皮损伤起保护性作用。
- 李志臻李芳萍叶建红严励李焱傅祖植
- 关键词：抵抗素内皮细胞活性氧簇
- 胰岛素、肿瘤坏死因子α和瘦素对抵抗素表达的影响被引量：1
- 2009年
- 【目的】探讨胰岛素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及瘦素对3T3-L1脂肪细胞resistin mRNA表达的影响。【方法】诱导3T3-L1前体脂肪细胞分化为脂肪细胞,用不同浓度的胰岛素、TNF-α及瘦素分别处理3T3-L1脂肪细胞24 h,RT-PCR的方法检测3T3-L1脂肪细胞resistin mRNA的表达。【结果】3T3-L1脂肪细胞被0、10、100及500 nmol/L的胰岛素处理后,resistin mRNA表达量分别是0.87±0.11、0.79±0.13、0.39±0.07和0.21±0.06(P<0.05,n=3),10、100及500 nmol/L胰岛素分别使resistin mRNA减少10%、55.2%和75.9%;3T3-L1脂肪细胞分别被0、10、100及500 ng/mL TNF-α处理后,resistin mRNA的表达量分别是0.68±0.12、0.59±0.08、0.25±0.07和0.12±0.04(P<0.05,n=3),10、100及500 ng/mLTNF-α分别使resistin mRNA减少13.1%、63.1%和82.4%;③3T3-L1脂肪细胞被0、10、100及500 ng/mL瘦素分别处理后,resistin mRNA表达量分别为0.73±0.11、0.79±0.16、0.69±0.08和0.70±0.09(P>0.05,n=3)。【结论】胰岛素和TNF-α抑制3T3-L1脂肪细胞resistin mRNA表达,且抑制效应与剂量呈依赖关系,而瘦素对3T3-L1脂肪细胞resistin mRNA表达无明显影响。
- 李芳萍李志臻张淼严励傅祖植
- 关键词：抵抗素脂肪细胞MRNA表达
- 抵抗素对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响被引量：1
- 2009年
- 【目的】抵抗素(resistin)是一种与胰岛素抵抗(IR)密切相关的脂肪细胞因子。本研究通过观察resistin对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响,以探讨resistin在骨骼肌IR发生中的作用。【方法】构建含resistin基因的重组表达质粒pcDNA3.1-resistin,用于转染C2C12肌细胞株,使其表达resistin,用3H-2-脱氧葡萄糖进行葡萄糖摄取试验,用D-[14C(U)]葡萄糖进行葡萄糖氧化和糖原合成试验,RT-PCR检测肌细胞的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRMA。【结果】pcDNA3.1-resistin转染的C2C12肌细胞株可表达resistin;resistin使肌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率减少约30%,并使GLUT4mRNA表达降低28%,而对葡萄糖氧化和糖原合成无显著影响。【结论】resistin可能通过抑制骨骼肌GLUT4mRNA的表达而降低葡萄糖摄取,但对葡萄糖氧化和糖原合成影响较小,提示resistin在骨骼肌IR发生中的作用有限。
- 李芳萍李志臻张淼付玉如严励傅祖植
- 关键词：抵抗素葡萄糖代谢肌细胞
- 抵抗素上调脂肪酸转位酶表达对HepG2细胞脂质积聚的作用
- 2017年
- 目的探讨抵抗素在棕榈酸诱导下对HepG2肝细胞脂质积聚的作用及其对脂肪酸转位酶(FAT/CD36)表达调控的影响。方法 50 ng/ml重组人抵抗素及0.5 mmol/L棕榈酸孵育HepG2肝细胞,之后用100 nmol/L胰岛素处理,采用实时定量RT-PCR检测胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)1 mRNA水平,流式细胞仪检测胞膜CD36表达,尼罗红(Nile Red)染色后激光共聚焦显微镜检测胞内脂质含量。结果与对照组相比,抵抗素增加胞膜FAT/CD36含量(P<0.05),促进HepG2细胞SREBP1 mRNA表达(P<0.05),使胞内红色脂肪小滴增多(P<0.05)。结论在高浓度游离饱和脂肪酸环境中,抵抗素在基础及胰岛素刺激状态下通过上调HepG2的CD36表达,刺激SREBP1转录,导致HepG2肝细胞内脂质积聚。
- 罗招凡李芳萍程桦
- 关键词：抵抗素胰岛素CD36
- 男性2型糖尿病患者伴非酒精性脂肪肝病的性激素变化——附53例报告被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨男性2型糖尿病(T2DM)伴非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者性激素变化情况。方法:53例男性T2DM患者按有无合并NAFLD分为脂肪肝组(26例)和对照组(27例),检测两组性激素水平、糖脂代谢指标及氨基转移酶水平,比较两组间的差异。结果:脂肪肝组HDL-C、性激素结合蛋白(SHBG)、卵泡刺激素(FSH)显著低于对照组(P<0.05),体质量指数、腰臀比、三酰甘油、ALT、AST、雌二醇高于对照组(P<0.05),两组总睾酮、黄体生成素、催乳素比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:与单纯T2DM男性患者相比,T2DM伴NAFLD男性患者雌二醇水平升高,SHBG、FSH降低。
- 江小平李芳萍
- 关键词：2型糖尿病非酒精性脂肪肝病性激素胰岛素抵抗
- AMPKα2基因克隆及其野生型和突变型真核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 背景:实验表明,通过激活单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP-Activated Protein Kinase,AMPK)α2可以增加胰岛素的敏感性和骨骼肌葡萄糖的摄取,其有望成为预防和治疗2型糖尿病的新的生理和药理作用靶点。目的:克隆人的AMPKα2基因,并构建其野生型和突变型真核表达载体。设计:单一样本观察。时间及地点:实验于2007-04/2008-01在中山大学附属第二医院临床分子生物实验室完成。材料:QuikChangeⅡ Site-Directed Mutagenesis Kit为Stratagene公司产品。真核表达载体pcDNA3.1(+),大肠杆菌DH5α为实验室保存。人骨胳肌组织来源于中山大学附属第二医院手术截肢患者,获患者知情同意,新鲜取材后液氮冷冻。方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨骼肌扩增AMPKα2基因,并将其克隆到T载体,通过测序对其进行鉴定。采用Quickchange定点诱变试剂盒对AMPKα2基因进行体外定点诱变,并将其野生和突变的编码基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,通过酶切和测序进行鉴定。主要观察指标:①目的基因的克隆。②定点诱变。③真核表达质粒的构建。结果:成功克隆了AMPKα2基因,大小约1700bp,与已发表的AMPKα2同源性为99%,GenBank录入号EF056019。成功将AMPKα2第45位Lysine(AAA)突变为Arginine(AGA),成功构建了野生型和突变型pcDNA-AMPKα2重组质粒。结论:实验成功克隆了AMPKα2基因,构建了其野生型和突变型真核表达载体。
- 罗招凡李芳萍丁鹤林程桦
- 关键词：克隆突变真核表达载体
- 抵抗素与肝脏胰岛素抵抗的关系被引量：1
- 2008年
- 抵抗素是一种脂肪细胞因子,研究发现高抵抗素水平可诱导肝脏胰岛素抵抗发生,其机制可能是抑制腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化,上调糖异生关键酶PEPCK和G6Pase的表达促进糖异生,从而使肝糖输出增多。肝脏是胰岛素作用的重要靶点,也是机体代谢的关键器官。肝脏胰岛素抵抗时,糖脂代谢紊乱加重机体胰岛素抵抗,促进2型糖尿病的发生。AMPK是物质代谢的关键激酶,通过磷酸化作用调节糖脂代谢相关酶的活性以及调节机体的能量平衡。抵抗素通过AMPK调节肝糖代谢这一观点为探讨抵抗素在胰岛素抵抗中的作用提供了新的思路。
- 王斐李芳萍
- 关键词：抵抗素肝脏胰岛素抵抗腺苷酸活化蛋白激酶糖异生
