江苏省自然科学基金(BK2007033)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王伟吴树明张宜乾谢悦张芳更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院山东大学江苏省中医药研究院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 经气管／静脉途径行肺脏腺病毒载体基因转染的效率和毒性分析被引量：3
- 2008年
- 目的:分别经气管和静脉途径转染腺病毒载体基因至肺组织,探索不同给药途径对肺组织的转染效率和腺病毒载体转基因治疗的安全性。方法:分别通过气管内滴入和静脉注射途径向家兔转染携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒载体(Ad-GFP 2×109pfu),于第3 d、7 d、14 d、21 d处死动物,荧光显微镜下观察测肺、肝脏、心脏组织GFP表达,HE染色观察组织病理改变。结果:气管转染组第3 d仅在肺组织内表达GFP,持续21d,且强度大;静脉注射转染组第3 d可在肺、肝脏、心脏组织测及GFP表达,14 d皆消失,强度较弱。HE染色显示,气管转染组第3 d可见肺脏炎性反应,第14 d炎性反应消失,肝脏、心脏均未见炎性反应;静脉注射转染组第3 d可见肺脏、心脏及肝脏内有轻度炎性反应,7 d后炎性反应皆消失。结论:肺脏经气管途径转染腺病毒载体具有较高的靶向性和较长时间基因表达的优点,虽可造成肺部一过性免疫炎性反应,仍不失为肺脏转基因治疗的有效和相对安全的途径。
- 王伟吴树明张中明张宜乾
- 关键词：腺病毒载体绿色荧光蛋白
- 肝细胞生长基因转染诱导肺高压模型动物肺血管生成的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的在家兔高动力性肺动脉高压模型上经气管途径转染携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad—HGF），探讨外源HGF基因转染诱导侧支肺血管生成的可行性。方法1月龄幼兔正中开胸，行左无名动脉与主肺动脉吻合，通过持续左向右分流，3个月后建立高动力性肺动脉高压模型。将模型动物随机分为对照组、GFP转染组、单次HGF治疗组和重复HGF治疗组。HGF治疗组（单次或1周后重复）通过气管内滴入的方法转染Ad-HGF。2周后，通过RT-PCR和免疫组织化学检测HGF基因和蛋白表达。分别在基因转染后14d和30d通过免疫组织化学检测肺微血管和小动脉密度。1个月时，肺血管造影观测侧支血管建立情况。结果气管内滴入Ad—HGF后2周，肺组织RNA提取后凝胶电泳显示有484bp长的特异性片段出现，免疫组化可检测到肺血管内皮、肺泡上皮细胞内HGF表达。肺组织病理切片观察可见HGF基因治疗组肺血管密度（单次HGF治疗组和重复HGF治疗组）明显高于对照组和GFP转染组，增多的血管以微血管为主，1个月后，肌性肺动脉明显增多。肺血管造影证实HGF基因治疗组侧支血管较对照组和GFP转染组丰富。结论外源性HGF基因经气管转染，早期（2周内）以诱导肺微血管新生为主，后期（1个月时）可促进肺小动脉生成。
- 王伟吴树明张中明张宜乾
- 关键词：肺性新生血管化基因
- 外源性HGF基因转染对肺动脉高压兔肺血流灌注及肺动脉压力的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨外源性肝细胞生长因子(HGF)基因转染高动力性肺动脉高压家兔后促进侧支肺血管生成、改善肺血流灌注、降低肺动脉压力的可行性。方法:将肺动脉高压兔随机分为对照组、空病毒组和HGF基因转染组;HGF基因转染组经气管内滴入法转染Ad-HGF,对照组和空病毒组分别气管内滴入同体积PBS液和Ade-no-Null;4周后,通过MacLab/8s多功能生理仪行血流动力学检测,通过抗FⅧ+α-SMA抗体免疫荧光双标检测肺小动脉密度、FITC-lectin灌注+抗α-SMA荧光双标记了解肺血管灌注情况。结果:气管内给药4周后,HGF基因治疗组含平滑肌细胞的小动脉密度较肺动脉高压对照组和空病毒组(12.5±2.7)/mm2明显增多(P<0.05);HGF组肺血流灌注获得有效改善,而肺动脉高压对照组和空病毒转染组肺血管仍处于狭窄甚至闭塞状态;HGF治疗组肺动脉平均压明显低于肺动脉高压对照组和空病毒转染组(P<0.05)。结论:肺动脉高压模型动物经气管滴入法转染外源性HGF,可以促进肺侧支血管生成,增加肺灌注并有效降低肺动脉压力。
- 王伟张芳谢悦张宜乾吴树明
- 关键词：肝细胞生长因子血管新生肺动脉高压
- Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体的构建与表达
- 2011年
- 背景:单核细胞趋化因子(monocyte chemotacti cprotein,MCP)可促进新生血管的动脉化,形成功能性微动脉,进而实现血管新生。目的:构建Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体,包装、纯化并检测病毒滴度,观察其在体表达。方法:PCR法钓取目的基因MCP-1,将其亚克隆入pDC315-EGFP载体,利用辅助包装质粒pBHGloxΔE1,3Cre进行病毒包装得到Ad-EGFP-MCP-1,经呼吸道途径转染至肺动脉高压大鼠。结果与结论:通过PCR获得MCP-1全长cDNA,与GenBank比对,序列完全一致。荧光显微镜下可见所包装的Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体可在大鼠肺组织中稳定表达,1周时达高峰,持续约4周。证实实验成功构建并包装了Ad-EGFP-MCP-1,其在肺组织中可有效表达。
- 张芳王伟谢悦张昊
- 关键词：单核细胞趋化因子1腺病毒表达载体肺动脉高压
- 结缔组织病相关肺动脉高压模型的建立
- 2012年
- 目的通过成年sD大鼠腹腔一次性注射野百合碱，构建结缔组织病相关肺动脉高压模型方法的可行性。方法实验组一次性腹腔注入1％野百合碱溶液，剂量为50mg／kg，对照组腹腔注入同体积2：8：无菌乙醇和0．9％氯化钠注射液。2,4周后通过计算机控制多功能生理仪行血流动力学检测，通过肺组织病理学观察异硫氰酸荧光素（FITC）．凝集素灌注和抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光标记了解肺血管重构情况。2组间比较采用t检验。结果腹腔注射1％野百合碱溶液4周后，模型动物肺动脉测压[肺动脉收缩压（PASP）（41±6）mmHg，肺动脉舒张压（PADP）（24．3±3．8）mmHg，平均肺动脉压（mPAP）（29．8±4．2）mmHg]，与对照组[PASP（23±3）mmHg；PADP（8．5±2．4）mmHg；mPAP（17．1±2．5）mmHgJ比较，明显升高（P〈0．05），实验组肺组织病理学检查显示肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄，肺小动脉管壁厚度指数（TI）0．723±0．034和面积指数（AI）0．912±0．203明显高于对照组（0．314±0．023和0：414±0．021）（P〈0．05）。结论SD大鼠腹腔注射野百合碱4周后，可形成肺动脉高压模型，该模型与临床结缔组织病相关肺动脉高压的病理生理相接近，且稳定、可靠、经济。
- 张芳谢悦张昊王伟
- 关键词：结缔组织疾病高血压肺性动物
- 携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染人脐静脉内皮细胞的研究被引量：1
- 2010年
- 由帆管内皮细胞损伤及功能失调所致相关疾病日渐增多。我们体外培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVECS），测定携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Ad—GFP）对HUVECS的转染效率。
- 刘瑞芳王伟曹广庆刘凯吴树明
- 关键词：人脐静脉内皮细胞绿色荧光蛋白病毒转染内皮细胞损伤HUVECS
