“十一五”国家科技攻关计划(06G027)
- 作品数：10 被引量：36H指数：4
- 相关作者：安萍于波李世拥蔡慧云白雪更多>>
- 相关机构：北京军区总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- FasL基因表达对缺氧状态下直肠癌细胞增殖凋亡的影响
- 2009年
- 目的探讨直肠癌侵袭转移过程中FasL基因表达对细胞增殖凋亡的影响。方法采用北京军区总医院普通外科实验室构建的4组不同侵袭力的人直肠癌HR-8348细胞亚型HR-8348B、HR-8348L、HR-8348F和HR-8348As，并用化学缺氧法构建上述4组细胞的缺氧12h模型，以Western印迹法验证各组细胞内FasL蛋白的表达水平和缺氧状态下细胞内FasL蛋白的表达，流式细胞仪测定细胞周期分布并计算细胞增殖指数，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖能力改变并计算细胞抑制率，末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡状况。结果Western印迹显示FasL蛋白于40000处显色。常氧条件下HR-8348F细胞内FasL的表达水平显著高于HR-8348B、HR-8348L和HR-8348As（F=361.149。P〈0.01）；缺氧12h时各组细胞均生长良好，形态较常氧状态皱缩；HR-834F，细胞内FasL的表达水平仍显著高于其他3组（F=278.766，P〈0.01），但其自身常氧与缺氧状态下FasL的水平差异无统计学意义（t=1.762，P〉0.05）。缺氧12h后各组细胞增殖均受到抑制，HR-8348F细胞的增殖指数（60.43±3.72）显著高于HR-8348B（40.01±3.30）、HR-8348L（41.30±4.06）和HR-8348As（35.87±4.39）（F=39.477，P〈0.01），增殖抑制率（17.30±1.98）和凋亡指数（13.10±1.04）显著低于HR-8348B（33.70±4.33和21.60±1.31）、HR-8348L（34.20±3.92和20.10±1.15）、HR-8348As（38.00±4.55和23.90±1.23）细胞（F分别为28.811和76.462，P〈0.01）。结论缺氧环境中，直肠癌细胞FasL表达增强可导致细胞增殖加速、凋亡减少和侵袭能力增强。促进细胞对微环境缺氧的耐受。
- 赵菲李世拥安萍于波蔡慧云
- 关键词：直肠肿瘤基因FAS配体缺氧
- 结直肠癌原发灶及其肝转移灶的蛋白表达差异研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究结直肠癌发生及其肝转移过程中蛋白质的表达差异,以及这些差异蛋白与肝转移的关系。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE)对比分析正常肠黏膜、结直肠癌原发灶及其肝转移灶中的蛋白质组表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点。采用免疫组化方法验证差异蛋白在结直肠癌及其肝转移灶组织中的表达情况。结果结直肠癌原发灶与肝转移灶组织中蛋白质组分有明显差异。平均每张胶大约有900个蛋白点,结直肠癌原发灶与肝转移灶组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为46个。共分析了20个差异蛋白点,其中2个蛋白点在肝转移灶组织中表达下调,16个蛋白点肝在转移灶组织中表达上调。经质谱鉴定,激活蛋白因子2B、腺苷蛋氨酸变异体在肝转移灶组织中表达下调,锌指蛋白64同系物、鸟嘌呤核苷酸交换因子4、人精氨酸酶、人谷胱甘肽S-转移酶A3、肿瘤坏死因子α-诱导蛋白9等蛋白在肝转移灶中表达上调。经免疫组化方法验证人精氨酸酶表达在肝转移灶组织中高于原发灶组织。结论结直肠癌原发灶及其肝转移灶蛋白质组表达有显著差异,一些差异蛋白与结直肠癌的肝转移相关。人精氨酸酶可能是结直肠癌肝转移的生物标志物之一。
- 白雪李世拥于波安萍蔡慧云
- 关键词：结直肠癌肝转移蛋白质组学
- 组织蛋白酶B表达对结直肠癌细胞侵袭行为的影响被引量：5
- 2008年
- 目的探讨组织蛋白酶B(CatB)表达对结直肠癌细胞黏附和侵袭行为的影响。方法选用人结肠癌细胞系LoVo和人直肠癌细胞系HR-8348,将含CatB全长cDNA的质粒pcDNA3CatB分别转染LoVo和HR-8348细胞。用RT-PCR方法检测CatBmRNA表达,采用细胞学实验方法分别测定并比较对照组、空载体转染组和CatB转染组细胞的黏附能力和细胞侵袭能力。结果CatB转染后,LoVo、HR-8348细胞中可检测到CatBmRNA的表达。对照组、空载体转染组、CatB转染组LoVo细胞与基质蛋白的黏附力分别为0.4616±0.1487、0.4121±0.2158、0.6916±0.1508。CatB转染组LoVo细胞黏附率高于对照组和空载体转染组,差异有显著性意义(F=5.8390,P<0.01)。对照组、空载体转染组、CatB转染组HR-8348细胞与基质蛋白的黏附率分别为0.4514±0.1195、0.5325±0.0999、0.7193±0.1013。CatB转染组HR-8348细胞黏附力高于对照组和空载体转染组,差异有显著性意义(F=13.1034,P<0.01)。对照组、空载体转染组和CatB转染组LoVo细胞侵袭数分别为47.09±8.16、52.41±6.24、66.47±8.77,三组细胞的侵袭能力有显著差异(F=9.8843,P<0.01),CatB转染组LoVo细胞侵袭数高于对照组和空载体转染组。对照组、空载体组和CatB转染组HR-8348细胞侵袭数分别为43.18±4.57、45.99±6.24、72.41±9.34,三组细胞侵袭力有显著差异(F=31.8474,P<0.01)。CatB转染组HR-8348细胞侵袭数高于对照组和空载体转染组。结论CatB表达增强了结直肠癌细胞的运动迁徙能力和与细胞外基质的黏附能力,可促进癌细胞的侵袭和转移。
- 于波李世拥安萍苏宏左富义白雪
- 关键词：结直肠肿瘤组织蛋白酶B
- T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测结直肠癌细胞方法的建立及其意义
- 2008年
- 目的探讨T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测循环血中结直肠癌细胞的可行性及其价值。方法配制不同浓度的HT29细胞悬液并加入1×107个健康人外周血单核细胞,建立模拟结直肠癌循环肿瘤细胞的模型,从中分离出有核细胞后,加入生物素化抗CEA单克隆抗体(针对Gold抗原决定簇Ⅳ),孵育后加入亲和素-生物素-DNA分子,再加入T7 RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并用RT-PCR检测从模型中分离出的有核细胞中CEA mRNA的表达情况。结果建立了检测结直肠癌细胞的T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术,最低可从1×107个单核细胞中检出5个癌细胞,比RT-PCR最低可从1×107个单核细胞中检出1×102个癌细胞更加敏感。结论T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术可用于检测外周血中的循环肿瘤细胞,是一种敏感的检测结直肠癌细胞的方法。
- 朱自满李世拥安萍于波
- 关键词：反转录聚合酶链反应T7RNA聚合酶结直肠肿瘤
- 结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织相关差异表达蛋白研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE),对比分析结直肠癌原发灶、癌旁正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点;采用细胞转染方法,将差异蛋白基因导入结直肠癌细胞,观察细胞生物学行为的改变。结果结直肠癌原发灶与正常肠黏膜组织中蛋白质组分有明显差别。结直肠癌原发灶组织与正常肠黏膜组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为60个。共分析了8个差异蛋白点,其中2个蛋白点在原发灶组织中表达下调,6个蛋白点在原发灶组织中表达上调。经质谱鉴定,碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)在原发性组织中表达下调,醛缩酶A等在原发灶中表达上调。将CAII cDNA克隆转染结直肠癌细胞后,癌细胞侵袭、趋化运动能力及耐药性均明显降低。结论结直肠癌原发灶和正常肠黏膜蛋白质组表达有显著差异,CAⅡ、PDI表达降低和醛缩酶A表达增强可能与结直肠癌的发生相关。
- 白雪李世拥于波安萍蔡慧云
- 关键词：结直肠癌蛋白质组学
- 组织蛋白酶B与金属硫蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义被引量：4
- 2008年
- 目的探讨组织蛋白酶B(CatB)和金属硫蛋白(MT)表达与结直肠癌淋巴结和肝转移的关系。方法采用免疫组化方法检测82例结直肠癌患者原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶组织中CatB、MT的表达,对比分析CatB、MT表达与临床分期和病理类型的关系。结果结直肠癌原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中CatB表达阳性率分别为48.8%、20.7%、66.7%、59.1%,MT表达阳性率分别为53.7%、26.8%、71.4%、72.7%。结直肠癌原发灶、转移淋巴结和肝转移组织中CatB、MT表达阳性率均高于正常肠黏膜组织。转移淋巴结和肝转移灶中CatB、MT表达阳性率高于癌原发灶和无转移淋巴结组织。Dukes C、D期CatB、MT表达阳性率高于Dukes A、B期(χ2=11.0244、10.9338,P<0.01)。低分化腺癌和黏液腺癌CatB、MT表达阳性率高于高分化和中分化腺癌(χ2=10.9338、10.1148,P<0.01)。结论CatB、MT表达增强与结直肠癌的浸润和淋巴结、肝转移有关,可作为评价结直肠癌患者预后的重要指标。
- 安萍于波李世拥左富义白雪蔡惠云
- 关键词：结直肠肿瘤组织蛋白酶B金属硫蛋白
- FasL诱导HIF-1α表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响被引量：6
- 2008年
- 目的探讨FasL诱导缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响。方法将含FasL全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1 FasL转染人直肠癌细胞系HR-8348,通过Transwell侵袭小室实验检测癌细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞不同缺氧时点HIF-1α表达水平。结果细胞侵袭实验表明,FasL转染组HR-8348细胞穿透Transwell滤膜细胞数为12.9±2.4,明显多于空载体转染组和对照组(分别为7.7±2.1和8.1±2.0,P<0.05)。各组细胞在缺氧0h时点无HIF-1α表达,6h时点HIF-1α仅有微量表达,缺氧12h与24h时点FasL阳性细胞组(FasL转染组)HIF-1α表达水平明显提高(P<0.05),FasL阴性细胞组(对照组和空载体转染组)HIF-1α表达水平无显著变化(P>0.05)。同一缺氧时相HIF-1α表达水平组间比较,缺氧0h与6h各组间均无显著性差异(P>0.05),缺氧12h与24h转染FasL组显著高于空载体转染组和对照组(P<0.01)。结论直肠癌细胞中FasL诱导HIF-1α表达的因素,可促进直肠癌细胞对缺氧的适应及提高癌细胞的侵袭能力。
- 赵菲李世拥安萍于波蔡慧云
- 关键词：直肠肿瘤FASL缺氧诱导因子-1Α
- 结直肠癌患者血清可溶性E-选择素表达及临床意义的研究被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨可溶性E-选择素表达对结直肠癌诊断及预后判断的临床意义。方法:采用ELISA法检测结直肠癌(结直肠癌组)307例、结直肠良性疾病(良性疾病组)38例和正常人(正常对照组)30例可溶性E-选择素血清水平,分析其阳性表达与肿瘤临床病理特征的关系,并与CEA、CA199和CA242比较特异性、敏感性。结果:结直肠癌组血清可溶性E-选择素表达水平为(66.82±27.91)ng/mL,与正常对照组[(17.94±5.53)ng/mL]及良性疾病组[(21.65±8.18)ng/mL]比较,差异具有非常显著性统计学意义(P<0.01)。血清可溶性E-选择素阳性表达与肿瘤部位及组织学分型无明显相关(P>0.05),但与Dukes病理分期及肝转移呈显著正相关(P<0.05,P<0.01)。结直肠癌组血清可溶性E-选择素、CEA、CA199和CA242阳性率分别为65.47%、36.16%、26.71%和33.55%,可溶性E-选择素与另3项常规肿瘤标志物阳性率比较,差异具有非常显著性统计学意义(P<0.01),采用3项常规肿瘤标志物平行联检法,其诊断灵敏度为52.20%,明显低于可溶性E-选择素阳性率(P<0.01)。结论:可溶性E-选择素有可能成为结直肠癌早期辅助诊断、预测复发转移及评估预后有价值的肿瘤标志物。
- 安萍蔡惠芸齐洪峰张艳刘晶
- 关键词：结直肠肿瘤可溶性E-选择素生物学标记肿瘤标志物
- FasL蛋白及其相互作用蛋白对直肠癌细胞耐药性影响的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨FasL蛋白及其相互作用蛋白在直肠癌细胞耐药中的作用机制。方法:利用酵母双杂交系统在相互作用蛋白研究中的特性,筛选与FasL蛋白相互作用较强的蛋白质,通过细胞学实验(MTT法)研究FasL蛋白及其相互作用蛋白对直肠癌细胞耐药性的影响。结果:经过筛选发现,FasL蛋白与anchor attachment蛋白、金属硫蛋白1K具有较强的相互作用。经细胞耐药学实验证实,FasL蛋白、anchor attachment蛋白与金属硫蛋白1K组直肠癌HR-8348细胞的耐药性明显高于其他组细胞,差异具有非常显著性统计学意义(P<0.01),FasL蛋白组以及FasL蛋白和金属硫蛋白1K组直肠癌HP-8348细胞的耐药性均高于空白对照组,差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。结论:FasL蛋白与anchor attachment蛋白1K结合后,增强了金属硫蛋白1K在结直肠癌细胞中的耐药能力,可能促进了结直肠癌的复发与转移。
- 左富义李世拥安萍于波蔡惠芸
- 关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移酵母双杂交FASL蛋白细胞耐药性
- 结直肠癌患者血清中组织因子含量与临床意义的研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨结直肠癌患者血清中组织因子(TF)含量及其在临床诊断和预后中的意义。方法:应用ELISA方法检测105例正常人(对照组)、100例结直肠癌患者(结直肠癌组)术前血清中TF浓度。同时检测100例结直肠癌患者血清肿瘤标志物CEA、CA242、CA19-9含量;44例结直肠癌患者手术后获得随访,比较TF阴性与阳性获随访者的生存率。结果:结直肠癌组血清TF水平[(1.35±1.14)U/L]明显高于对照组[(0.17±0.15)U/L],与年龄、组织学分级无关(P>0.05),与淋巴结转移及术后复发、转移有相关性(P<0.05),在Dukes分期中,D期TF水平明显高于其他3期(P<0.05);TF敏感性(64%)优于肿瘤标志物CEA、CA242、CA199(P<0.01)。44例获随访者中血清TF阳性结肠癌患者生存率明显低于阴性者。结论:TF在结直肠癌患者血清中呈高表达,可能是对结直肠癌诊断和评估预后的一个有价值指标。
- 关亚伟李世拥安萍于波
- 关键词：结直肠肿瘤血清预后肿瘤标志物
