国家自然科学基金(30400268)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：邹竹荣邹华英范云六张春义亓燕红更多>>
- 相关机构：云南师范大学中国农业科学院生物技术研究所云南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人脂联素在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1
- 2010年
- 为了提高重组人脂联素在大肠杆菌中的可溶性,构建和表达了增溶标签与人脂联素的融合表达载体.这些标签包括大肠杆菌硫氧还蛋白和NusA蛋白、酿酒酵母SUMO蛋白和噬热海洋菌Thermotoga maritime的红素氧还蛋白.结果显示,所有的人脂联素融合蛋白在大肠杆菌中都获得了高水平的表达,但可溶性存在很大差异,说明不同融合标签对人脂联素可溶性表达的促进作用不同.其中,红素氧还蛋白与SUMO蛋白组合一起对人脂联素可溶性的增强作用最为显著,其相应的融合蛋白几乎全部可溶.另外,通过酵母SUMO/Ulp1反应,经His标签亲和层析纯化得到的人脂联素融合蛋白能被有效酶切,加工为人脂联素成熟肽产物.
- 周培封淑颖邹竹荣李雪娇詹晓莹曹丽娟
- 关键词：大肠杆菌可溶性表达
- SUMO基因的内在原核启动子活性及其在大肠杆菌蛋白表达系统中的应用被引量：4
- 2011年
- SUMO融合系统已成为目前大肠杆菌重组蛋白生产的重要手段,但在载体构建效率和蛋白可溶性等方面仍有待改进。本研究在PCR克隆酿酒酵母SUMO基因Smt3(Sm)时意外发现Sm具有组成型原核启动子活性;而且经软莓BPROM程序预测发现大多数物种SUMO基因编码区都具有依赖σ70的原核启动子。进一步通过整合Sm启动子和Sm 3′末端StuⅠ位点特性以及引入His标签和超酸增溶标签,构建了基于Sm’-LacZα融合基因的一系列通用克隆表达载体,并通过蓝白斑筛选和SDS-PAGE分析进行了多个靶蛋白基因的克隆和表达,结果表明实现了基因表达载体的快速构建、蛋白高可溶性表达和关联蛋白的共表达等目标。因此,集成诸多特性而改良的SUMO融合技术可以成为大肠杆菌蛋白表达系统的有力工具,建立的共表达载体系统还可以用作研究细胞内蛋白间的相互作用。
- 亓燕红邹竹荣邹华英范云六张春义
- 关键词：共表达大肠杆菌
