浙江省自然科学基金(Y2100582)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：曹建明叶薇吕建新陈赛慧郑屹更多>>
- 相关机构：温州医科大学温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响被引量：8
- 2013年
- 目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响。方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体;ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成;利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态;组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行;线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷。结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高;体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降;细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变;自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP合成与能荷呈明显下降趋势。结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响三羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低。
- 叶薇陈赛慧郝东杰郑屹曹建明吕建新
- 关键词：衰老线粒体氧化性应激
- 偶氮氯膦Ⅲ-Cu(Ⅱ)共振散射光谱法测定人血清蛋白
- 2015年
- 目的建立了简单、灵敏的测定人血清中总蛋白的新方法。方法在pH3．5的B—R缓冲溶液中，往偶氮氯磷Ⅲ-Cu（Ⅱ）体系中加入蛋白质，体系的共振散射信号线形增加，根据信号增加值计算蛋白质含量。结果该法的线性范围为0～1．6mg／L，检出限为11．5μg／L，回收率为97．5％～105．3％，批内变异系数和批间变异系数分别为1．0％、2．4％。将该法用于人血清中蛋白质的测定，与医院测定结果一致。结论该法灵敏、快速、简便，具有一定的实用价值。
- 郑帆方芳刘玲玲曹建明赵长容
- 关键词：蛋白质共振散射人血清
- D-半乳糖诱导细胞衰老模型的线粒体能量代谢功能研究被引量：6
- 2017年
- 目的探讨D-半乳糖（D-Gal）致衰老细胞的线粒体能量代谢功能。方法用含55mmol／LD-Gal培养基培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）细胞72h后，进行CCK8法细胞增殖能力分析、β-半乳糖苷酶染色、p21蛋白表达水平检测以鉴定细胞衰老，并通过分析细胞活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛含量及线粒体DNA（mtDNA）氧化损伤水平评价细胞氧化应激状态。通过电镜观察细胞的线粒体形态、流式细胞术分析线粒体数量、JC-1法检测线粒体膜电位、高效液相色谱（HPLC）法检测ATP含量、Seahorse细胞能量代谢检测系统分析线粒体氧耗率，评价线粒体结构和能量代谢功能。结果D-Gal致MRC-5细胞增殖减缓，β-半乳糖苷酶染色显示蓝染细胞数增加，p21蛋白表达增高；D-Gal处理后细胞ROS和丙二醛水平升高，SOD活性下降，mtDNA氧化损伤水平增加。D-Gal处理组细胞线粒体嵴和双层膜结构变模糊，线粒体数量减少，线粒体膜电位下降，且ATP合成减少，线粒体氧化呼吸功能下降。结论55mmol／LD-Gal引起线粒体结构损伤和能量代谢功能下降，与细胞衰老相关。
- 曹建明郝东杰陈华乐尉骁侯渊博叶薇
- 关键词：半乳糖细胞衰老线粒体能量代谢
