国家自然科学基金(31172292)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：段滇宁韩俊源张亚群郭华张书霞更多>>
- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- PCV2诱导PAMs分泌Ⅰ型干扰素信号途径初探
- 为了研究PCV2引发的仔猪肺泡巨噬细胞（PAMs）分泌Ⅰ型干扰素的机制。选用14头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,...
- 陈萌萌张亚群韩俊源段滇宁张书霞
- 关键词：猪圆环病毒猪肺泡巨噬细胞信号途径
- 猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化被引量：4
- 2014年
- 选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分为对照组和PCV2感染组(PCV2组)进行体外培养,分别在培养0、6、12、24和48h收集AMs。间接免疫荧光法定位检测PCV2感染AMs情况;荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录量的变化。结果表明,TLR2mRNA的转录量在感染后6h迅速升高,12h后又迅速下降,但仍显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),到48h时恢复;TLR3mRNA的转录量,攻毒后6和12h显著高于对照组(P<0.05),24和48h时恢复到对照组水平;PCV2明显升高感染后12hAMs中TLR4mRNA的转录(P<0.05),而明显抑制感染后24和48h的转录(P<0.05);PCV2引起感染后6和12h的AMs中TLR7、TLR8和TLR9mRNA转录量显著升高(P<0.01或P<0.05),而到感染后24和48h又恢复到对照组水平。结果表明,PCV2可显著影响体外培养仔猪AMs TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9mRNA的转录。
- 张亚群韩俊源郭华陈萌萌段滇宁张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR肺泡巨噬细胞TOLL样受体
- PCV2通过激活NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌被引量：2
- 2014年
- 选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋白含量的变化,电泳迁移率法(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果显示,细胞培养上清液中,PCV2组IL-4含量明显低于对照组及抑制剂-PCV2组(P<0.05),对照组与抑制剂-PCV2组无差异;PCV2组细胞培养上清液中IL-12含量显著高于对照组(P<0.05),抑制剂-PCV2组极显著低于PCV2组(P<0.01)。PCV2感染后可在淋巴细胞内观察到PCV2抗原,并主要存在于细胞浆中。淋巴细胞胞浆内MyD88蛋白含量,PCV2组极显著高于对照组(P<0.01),PCV2组与抑制剂-PCV2组之间无显著差异。PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著高于对照组;抑制剂和抑制剂-PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著低于对照组。结论:PCV2可感染体外培养的仔猪淋巴细胞,介导MyD88-NF-κB信号途径激活从而调节淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌。
- 段滇宁郭华李晓琳陈萌萌张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：淋巴细胞核因子ΚB白介素4白介素12
- PCV2通过激活MyD88调控体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10被引量：3
- 2014年
- 试验选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原、抗体均为阴性的30日龄断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分4组进行体外培养:对照组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)、PCV2感染组(PCV2组)、PCV2感染-MyD88干扰组(PCV2-干扰组)。采用小干扰RNA(siRNA)方法使MyD88基因沉默,并分别于培养后0、6、12、24和48h收集细胞及培养上清液。用荧光定量PCR法检测干扰效率,Western Blot方法检测细胞内MyD88蛋白的表达变化,ELISA方法检测培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的动态变化。结果显示,siRNA能使78%的MyD88基因沉默,并显著影响其蛋白表达;AMs中MyD88表达量,PCV2组从6h开始显著升高(P<0.05),PCV2-干扰组与PCV2组相比在12、24、48h差异极显著(P<0.01)。培养后各时间点,PCV2均能明显促进AMs分泌IL-1β(P<0.01或P<0.05),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-1β的分泌量均显著降低(P<0.05)。PCV2能显著增加感染后6和12hIL-6的分泌量(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-6的分泌量在6和12h显著降低(P<0.05)。PCV2明显促进感染后12、24和48hAMs分泌IL-10的能力(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-10的含量在24和48h均极显著的降低(P<0.01)。结果表明,PCV2可引起体外培养的PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10发生不同的变化,而MyD88是引起这些变化的重要调节因子。
- 韩俊源郭华张亚群段滇宁李晓琳陈萌萌张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型猪肺泡巨噬细胞髓样分化因子88
- PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞TLRs的影响被引量：4
- 2013年
- 选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原及抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,制成单个细胞悬液进行体外培养,并分为PCV2组和对照组,PCV2组用PCV2与脾细胞共同培养,对照组加等量RPMI-1640培养液。分别于培养0、6、12、24和48 h后收取悬浮的淋巴细胞,用间接免疫荧光法检测PCV2感染淋巴细胞的情况,相对定量RT-PCR法检测淋巴细胞中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达量,Western blot检测TLR3和TLR4的蛋白表达情况。结果显示:PCV2感染后,TLR2和TLR9 mRNA的表达量在12、24和48 h时均极显著高于对照组(P<0.01),TLR3和TLR4 mRNA的表达量在24 h时极显著高于对照组(P<0.01)。TLR3蛋白在6和12 h显著高于对照组(P<0.05),TLR4蛋白在6、12、24和48 h均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:PCV2感染能显著上调体外培养的仔猪淋巴细胞TLR2、TLR3、TLR4和TLR9 mRNA水平,并进一步显著上调仔猪淋巴细胞TLR3和TLR4蛋白的表达,从而导致机体炎性细胞因子的分泌紊乱。
- 李晓琳郭华刘子臣段滇宁张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型蛋白印迹法
- TMT定量分析PCV2感染仔猪肺泡巨噬细胞差异磷酸化蛋白的表达
- <正>目的猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine Circovirus,PCV2)引起的多种疾病,包括断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS),猪皮炎及肾病综合征(PDNS),猪增生性坏死性肺炎(PNP)...
- 陈萌萌吕英军韩俊源张亚群张书霞
- PCV2诱导PAMs分泌Ⅰ型干扰素信号途径初探
- 为了研究PCV2引发的仔猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分泌Ⅰ型干扰素的机制。选用14头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,...
- 陈萌萌张亚群韩俊源段滇宁张书霞
- 关键词：猪圆环病毒猪肺泡巨噬细胞信号途径
