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基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定: 2014年; 目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB。通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性。结果正确构建出重组质粒pET32aHA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性。TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P<0.01)。结论成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础。; 王静康喜龙焦扬熊丹宋丽杨芸潘志明焦新安; 关键词：H5亚型禽流感鞭毛蛋白血凝素原核表达

密码子优化的鸡白细胞介素-17在昆虫细胞中的表达研究: 2013年; 为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡白细胞介素-17(ChIL-17),本研究在前期研究工作基础上,将ChIL-17的编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造,经全基因合成后插入到转座载体pFastBacTMⅠ中,构建重组转移质粒pfast-mod.ChIL-17并转化DH10Bac感受态细胞。通过位点特异性转座将mod.ChIL-17基因整合到穿梭质粒Bacmid中,获得重组穿梭质粒Bacmid-mod.ChIL-17。应用脂质体将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-mod.ChIL-17。重组病毒传代扩增感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光检测目的蛋白的表达。结果表明,经过优化的ChIL-17在杆状病毒系统中获得表达。; 康喜龙王静潘志明杨芸赵雯焦新安; 关键词：密码子优化杆状病毒真核表达

沙门菌鞭毛蛋白在H7N9禽流感亚单位疫苗中的佐剂效应及其机制研究: 2013年3月，中国出现首例人感染新型H7N9禽流感病毒的病例，至今引起了五波流行，共导致1567人感染，死亡率接近40％。因此，针对H7N9禽流感开发一种安全有效的疫苗非常重要。与传统疫苗相比，亚单位疫苗具有更高的安全...; 宋丽; 关键词：亚单位疫苗鞭毛蛋白佐剂效应; 文献传递

沙门菌鞭毛蛋白与其受体相互作用的研究: 2016年; 沙门菌鞭毛蛋白是其鞭毛丝状部组成元件,参与一系列生理及病理过程。鞭毛蛋白通过结合细胞表面TLR5和胞质NLRC4,激活下游信号通路从而激发固有免疫应答和获得性免疫应答。此外,鞭毛蛋白可促进针对外源抗原的获得性免疫应答,因此可作为佐剂用于疫苗研制,而鞭毛蛋白与TLR5和NLRC4的相互作用也被用于研究其佐剂效应机制。; 周莹莹康喜龙潘志明焦新安; 关键词：鞭毛蛋白信号通路获得性免疫

减毒肠炎沙门菌C50336△sptP△rfbG缺失株的构建与鉴定: 【目的】细菌污染是影响食品卫生和安全的主要因素之一,其中沙门菌(Salmonella)污染引起的食物中毒占首位。疫苗在沙门菌防控中有着重要作用。然而在实际生产中,动物接种疫苗后,常无法用简单快速的方法鉴别免疫和自然感染。...; 翟贤月焦扬孟闯耿士忠潘志明焦新安; 关键词：肠炎沙门菌 DIVA 疫苗; 文献传递

鹅Toll样受体7基因的克隆及其功能分析: 2015年; 为克隆鹅Toll样受体7(go TLR7)基因并初步研究其生物学功能,以鹅脾脏组织总RNA反转录的c DNA为模板,PCR扩增go TLR7基因的CDS区序列,成功克隆了go TLR7基因,其全长3 141 bp,编码1 046个氨基酸。通过RT-PCR分析鹅不同组织中TLR7基因的表达,结果显示不同组织中TLR7基因的表达存在差异。构建真核表达质粒pc DNA3.1(+)-go TLR7,并与荧光素酶报告载体p GL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]共转染HEK293T细胞,检测其TLR7配体活性。结果显示,鹅TLR7可以对R848产生应答,能显著提高细胞NF-κB活性,并诱导IL-8的高水平分泌。; 宋红芹吴力力张美花宦海霞; 关键词：基因克隆功能分析

人癌胚抗原相关细胞黏附分子1介导的小鼠淋病奈瑟菌易感性: 2011年; 目的研究制备淋病奈瑟菌感染人癌胚抗原相关细胞黏附分子1（hCEACAMl）转基因小鼠模型的可行性。方法用hCEACAMl真核表达载体pCDPGICEAl，通过显微注射法制备转基因小鼠，PCR及序列分析法检测目的基因在小鼠基因组中的整合，Westernblot及FACS技术检测目的基因的表达，镜检及培养法检查淋病奈瑟菌对转基因小鼠的感染。结果产生的22只F0代小鼠中4只为转基因整合阳性，其中1只可表达hCEACAMl蛋白，且目的蛋白表达在细胞膜上。淋病奈瑟菌可在转基因小鼠中形成感染。结论hCEACAMl转基因小鼠可作为淋病奈瑟菌感染研究的转基因动物模型。; 李国才杜庆辉王晓红王劲松于峰刘双喜解如山焦红梅严华季明春; 关键词：转基因小鼠淋病奈瑟菌易感性

减毒肠炎沙门菌C50336△sptP△rfbG缺失株的构建与鉴定: 【目的】细菌污染是影响食品卫生和安全的主要因素之一,其中沙门菌(Salmonella)污染引起的食物中毒占首位。疫苗在沙门菌防控中有着重要作用。然而在实际生产中,动物接种疫苗后,常无法用简单快速的方法鉴别免疫和自然感染。...; 翟贤月焦扬孟闯耿士忠潘志明焦新安; 关键词：肠炎沙门菌 DIVA 疫苗

细菌鞭毛蛋白作为佐剂的研究进展被引量：3: 2015年; 细菌鞭毛蛋白作为Toll样受体5(TLR5)或NOD样受体C4(NLRC4)的配体,其结构决定了其既有抗原性又具有佐剂效应。将细菌鞭毛蛋白与外源抗原混合或融合表达,已获得多种有效的候选疫苗。细菌鞭毛蛋白佐剂效应主要是通过TLR5和NLRC4信号途径协同实现的。TLR5位于细胞表面,可触发炎性因子、趋化因子和Ⅰ型干扰素的分泌,启动天然免疫应答。NLRC4是细胞质中的模式识别受体,可识别细胞质中的多种配体并诱导相应免疫应答。另外,细菌鞭毛蛋白能募集T淋巴细胞和B淋巴细胞至次级淋巴器官,促进DCs和T淋巴细胞的活化。细菌鞭毛蛋白的可塑性将会使得以细菌鞭毛蛋白为基础的疫苗成为当前和未来研究的热点。; 宋丽郭亚鑫徐慧熊丹潘志明焦新安; 关键词：鞭毛蛋白佐剂 TOLL样受体5 疫苗

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