“十一五”国家科技攻关计划(06G080)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
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- 大鼠角膜缘上皮细胞的体外培养以及碱烧伤后β-连环蛋白表达的实验研究
- 2010年
- 目的探讨角膜缘上皮细胞的体外培养以及碱烧伤后β-连环蛋白(β-catenin)的表达规律。方法消化法培养大鼠角膜缘上皮细胞,并对其生物学特征[细胞形态、泛角质蛋白抗体(AE1/AE3)和细胞核增殖抗原(PCNA)]做初步鉴定;构建体外碱烧伤模型,利用实时定量聚合酶链反应和免疫荧光技术检测伤后各时相点β-catenin的表达。结果体外培养的角膜缘上皮细胞具典型的上皮细胞特点,大部分细胞分化程度较低且生活状态良好;核酸和蛋白水平均显示,伤后24小时β-catenin的表达有显著升高(P<0.05),至伤后48小时达到峰值(P<0.01)。结论在一定程度上可以利用角膜缘上皮细胞的研究结果来近似反映角膜干细胞的特点;Wnt经典信号途径参与了碱烧伤后的细胞修复过程。
- 王海燕严军蒋建新龙在云张冲黄苏娜王正国
- 关键词：上皮细胞碱烧伤Β-连环蛋白角膜缘
- 去甲肾上腺素增强大鼠腹腔巨噬细胞免疫功能被引量：1
- 2009年
- 周建云严军杨策刘庆程英蒋建新
- 关键词：细胞免疫功能去甲肾上腺素交感神经末梢免疫调控作用交感神经系统
- 大鼠严重创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4基因表达及受体反应性被引量：2
- 2008年
- 目的观察大鼠创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体(TLR)2/4基因表达及受体反应性变化。方法建立大鼠严重创伤(右侧胸部撞击伤复合双侧股骨闭合性骨折)模型,分别于创伤后2、6、12、24小时取腹腔巨噬细胞,以逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)测定TLR2/4的mRNA表达,以脂多糖(LPS)、Pam3CSK4刺激后取细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果创伤后2小时腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4的mRNA表达较正常对照组降低(P<0.05),直至创伤后24小时。行不同浓度LPS、Pam3CSK4刺激后细胞上清液TNF-α水平较对照组降低(P<0.01)。结论严重创伤后腹腔巨噬细胞TLR2/4基因表达降低,受体反应性下降。
- 杜权王正国朱佩芳蒋建新董蕻刘庆
- 关键词：创伤TOLL样受体肿瘤坏死因子基因表达
- 小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选被引量：2
- 2009年
- 目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-timePCR鉴定干扰效率。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml。Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上。结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础。
- 钟河江蒋建新王海燕杨策张冲严军刘庆黄苏娜
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- 巨噬细胞趋化检测方法的建立及皮质酮对其趋化功能的影响被引量：1
- 2009年
- 目的建立改良Boyden趋化小室(Boyden chamber)法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。方法分离成年Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔巨噬细胞。应用48孔Boyden chamber趋化板检测趋化功能。下室加入27μL的10nM FMLP作为趋化剂或含1%牛血清清蛋白的RPMI-1640作为阴性对照,将50μL不同细胞密度的大鼠腹腔巨噬细胞悬液(3、6、12×106/mL)置于上室以确定最适细胞密度,将趋化装置置于5%CO2、37℃细胞培养箱内孵育2、3h以确定最适孵育时间。同时,以0、10、501、000ng/mL皮质酮处理大鼠腹腔巨噬细胞,应用Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能。结果巨噬细胞对10nM FMLP趋化剂呈细胞密度依赖性增加,上室巨噬细胞密度为6×106/mL时为最适细胞密度,并且最适孵育时间为3h。低浓度皮质酮(10、50ng/mL)处理大鼠腹腔巨噬细胞其趋化指数显著高于对照组(P<0.01),而高浓度皮质酮(1 000ng/mL)处理后巨噬细胞趋化指数与对照组相比差异不明显。结论成功建立了改良Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能方法,皮质酮可呈剂量依赖性地影响巨噬细胞趋化功能,在无免疫刺激状态下,低浓度皮质酮能增强巨噬细胞趋化功能。
- 钟河江王海燕刘庆蒋建新杨策严军黄苏娜杨天德
- 关键词：巨噬细胞皮质酮
- 肾上腺切除大鼠冲击伤后天然免疫功能的变化及其与模式识别受体的关系被引量：1
- 2008年
- 目的下丘脑-垂体-肾上腺轴分泌的神经内分泌激素对天然免疫功能具有重要调控作用。本研究通过切除大鼠双侧肾上腺,观察冲击伤对大鼠主要天然免疫学指标的影响及其与模式识别受体表达的关系。方法Sprague-Dawley成年大鼠在肾上腺切除7d后遭受中度冲击伤,观察外周血白细胞数目,腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌功能、肝脏、肺脏和肠系膜淋巴结细菌移位以及肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,进而检测肺组织SR-A、CD14、TLR4mRNA的表达。结果肾上腺切除抑制冲击伤后外周血白细胞减少,腹腔巨噬细胞吞噬功能减弱,肝、肺、肠系膜淋巴结细菌移位以及肺组织TNF-α分泌在肾上腺切除后也进一步增强。肺组织SR-A、CD14、TLR4mRNA在肾上腺切除后减少,并伴有显著的炎症反应和组织损伤。结论肾上腺激素能增强创伤后机体的天然免疫反应,且与SR-A、CD14、TLR4介导密切有关。
- 杨策周琳琳严军王海燕周建云刘庆程英崔莉蒋建新
- 关键词：肾上腺切除激素模式识别受体内毒素
- 肾上腺素对巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察肾上腺素对巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响。方法收集大鼠腹腔巨噬细胞，采用不同浓度肾上腺素（E）（2—100μ/L）刺激lh或10μg/L肾上腺素刺激不时间，检测细胞趋化、黏附、吞噬功能和培养上清TNF-α的浓度。结果低浓度肾上腺素处理时，巨噬细胞趋化、黏附、吞噬功能均明显增强，细胞分泌TNF-α明显增多，其中以10μg／L肾上腺素处理时细胞功能增强最明显。但是随着肾上腺素浓度进一步增加，巨噬细胞功能未见进一步增强。时效实验结果显示，不同时间处理（0．5—5．0）h可不同程度地增强巨噬细胞趋化、黏附，吞噬和分泌TNF-α的功能，其中以处理1h作用最明显。结论适度肾上腺素刺激可明显增强臣噬细胞免疫功能。
- 周建云蒋建新严军杨策刘庆程英王海燕周琳琳顾玮曾灵
- 关键词：肾上腺素巨噬细胞免疫
- 皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激的作用被引量：2
- 2009年
- 目的:观察内源性糖皮质激素皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激相关蛋白GRP78、XBP1-S及ATF6蛋白表达水平的影响,并探讨皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用。方法:分离成年雄性C57/BL6小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为四组,分别以终浓度为0、10、50及1000ng/ml皮质酮处理小鼠腹腔巨噬细胞,时间为1h,提取细胞总蛋白,应用Westernblotting方法检测内质网分子伴侣GRP78蛋白及未折叠蛋白反应信号转导通路转录因子XBP1-S和ATF6蛋白质表达变化。结果:低浓度皮质酮(10、50ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1h后,均可显著地增加内质网分子伴侣GRP78蛋白表达,以50ng/ml皮质酮组增加最明显,而当皮质酮浓度达1000ng/ml时,GRP78蛋白增加不显著。并且,低浓度皮质酮(10、50ng/ml)可显著增强未折叠蛋白反应两个重要转录因子XBP1-S和p50ATF6蛋白表达。结论:这些结果表明低浓度内源性糖皮质激素皮质酮可诱发小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激,激活未折叠蛋白质反应信号转导通路,其可能与巨噬细胞免疫功能增强有关。
- 钟河江蒋建新王海燕杨策张冲严军刘庆黄苏娜
- 关键词：皮质酮巨噬细胞内质网应激
- 皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响被引量：6
- 2008年
- 目的进一步明确天然糖皮质激素对巨噬细胞免疫功能的影响及其时效和量效关系。方法收集大鼠腹腔巨噬细胞，分别用10～1000ng／ml的皮质酮（corticosterone，CORT）刺激，检测细胞的黏附、趋化和吞噬功能；使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果50ng／ml的皮质酮显著增强巨噬细胞的黏附功能（P〈0．05），10ng／ml和50ng／ml的皮质酮刺激细胞后，其趋化功能均显著增加（P〈0．05）。同时，50ng／ml的皮质酮还可显著增强巨噬细胞的吞噬功能（P〈0．05）和促进巨噬细胞分泌TNF-α（P〈0．01），而使用高浓度皮质酮（500ng／ml和1000ng／m1）处理时，巨噬细胞的上述功能增强趋势减弱或无增强；在0．5—5h范围内，皮质酮处理1h时细胞的吞噬功能和分泌TNF-α的功能增强最明显，刺激更长时间后其功能的增强趋势逐渐减弱。结论一定剂量的天然糖皮质激素急性刺激可明显增强免疫功能。
- 周建云蒋建新杨策严军王海燕刘庆程英
- 关键词：皮质酮巨噬细胞免疫
