国家自然科学基金(3997003)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张渝英马晴贾翠娟周海平更多>>
- 相关机构：中国科学院北京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 蛋白质二硫键异构酶相关蛋白A的表达及性质的研究被引量：1
- 2004年
- 克隆了AspergillusnigerT2 1中的蛋白质二硫键异构酶相关蛋白A(PRPA)基因 ,并将它插入pET2 3b表达载体。在E .coli中表达时 ,PRPA占菌体总蛋白的 34%。经过超声破细胞、硫酸铵分级沉淀和离子交换层析获得了纯度大于 90 %的重组蛋白。PRPA有二硫键异构酶活性。在PRPA存在下 ,变性和还原的溶菌酶复性率和复性速度降低 ,电泳结果表明溶菌酶聚集增多。
- 周海平贾翠娟张渝英
- 腾冲嗜酸热两面菌S5分子伴侣β亚基的表达、纯化和活性的初步分析被引量：1
- 2007年
- 用NdeI和BamHI酶切回收腾冲嗜酸热两面菌S5的分子伴侣β亚基基因片段插入pET-23b的相应位置,并分别在BL21(DE3)和Rosetta-gami^(TM)B(DE3)pLysS中表达。表达的β亚基以可溶的形式存在。β亚基在Rosetta-gami^(TM)B(DE3)pLysS中表达较高,其占菌体总蛋白的16．2%,且以单体和聚体形式同时存在。表达的菌体经超声破碎、70℃热处理后,上清中β亚基蛋白含量达到30%,再经(NH_4)_2SO_4沉淀、Bio-Gel A-1．5m和DEAE-Sepharose CL-6B柱层析,得到在SDS-PAGE呈电泳均一的β亚基,Native-PAGE表明其为聚体,有弱的ATPase活性。
- 马晴张渝英
- 关键词：分子伴侣Β亚基ATPASE
- 反向PCR方法克隆腾冲嗜酸两面菌的分子伴侣基因被引量：2
- 2005年
- 根据已知的Sulfolobus属的分子伴侣基因,设计简并引物,用PCR的方法从腾冲嗜酸两面菌(Acidianus tengchongensis)基因组DNA中分别克隆到了分子伴侣α亚基和β亚基的约500bp的基因片段。以它们为探针进行Southern杂交,确定了合适的限制性内切酶。以确定的限制性内切酶消化的基因组DNA环化物为模板,进行反向PCR反应,引物的延伸方向由已知序列出发沿环化分子向未知区域进行,扩增产物经测序表明为α亚基和β亚基基因。根据所得序列分别设计两对引物进行PCR,测序结果表明得到了α亚基和β亚基的完整基因。
- 马晴张渝英
- 关键词：反向PCR分子伴侣
