河南省科技攻关计划(092102110128)
- 作品数：31 被引量：120H指数：7
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- 蝴蝶兰几丁质酶基因的克隆及表达特性分析被引量：5
- 2016年
- 利用RT-PCR及RACE技术,克隆到蝴蝶兰1个几丁质酶基因PhCHT(GenBank登录号为KT992851),该基因cDNA全长1 210bp,包含37bp的5′-UTR、933bp开放阅读框和240bp 3′-UTR,编码310个氨基酸;该蛋白为糖苷水解酶第19家族成员,兼具有溶菌酶活性;生物信息学分析显示,该蛋白具N-端信号肽和跨膜结构,为胞外分泌蛋白;该蛋白与海枣、谷子、油棕和拟南芥的几丁质酶类似蛋白相近,并且在系统进化树上与甘蔗和陆地棉的Ⅶ类几丁质酶同属一个分支。PhCHT基因的表达分析表明,PhCHT在蝴蝶兰营养器官和生殖器官中均有表达,根中表达量最高;13℃/8℃低温处理3、6、9和15d时该基因的表达被抑制,4℃低温处理1、2和4h表达量升高。研究表明,PhCHT基因能够响应短期的冷胁迫。研究结果为进一步研究蝴蝶兰几丁质酶的系统进化及抗性育种奠定了基础。
- 袁秀云许申平宋彩霞崔波魏博
- 关键词：几丁质酶低温胁迫
- 蝴蝶兰ACC氧化酶cDNA片段的克隆及其反义植物表达载体的构建被引量：2
- 2009年
- 根据已报道的蝴蝶兰ACC氧化酶的基因序列,设计了一对引物,通过RT-PCR从蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC氧化酶的cDNA片段,将其连接到pMD19-T载体上进行测序.结果显示,该片段与参考的已报道序列具有99.70%的同源性.测序后将该基因的cDNA序列反向插入pBI221的CaMV35S启动子和nos terminator之间,构建了蝴蝶兰ACC氧化酶的反义基因植物表达载体,为进一步转化蝴蝶兰研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础.
- 崔波李长看马杰张先云叶永忠
- 关键词：ACC氧化酶基因克隆反义基因植物表达载体构建
- 文心兰OnAP1-like基因表达载体构建和遗传转化体系初探被引量：2
- 2014年
- 根据NCBI网站上文心兰OnAP1-like基因序列设计引物,用RT-PCR法从南茜文心兰花葶中扩增OnAP1-like基因,对扩增产物进行测序。结果表明,获得的南茜文心兰OnAP1-like基因为690bp,与报道序列完全一致。将OnAP1-like基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-OnAP1。对OnAP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的三维结构。结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,所表达蛋白为亲水性蛋白。确定了一种文心兰的遗传转化条件,得到筛选抗生素G418的最适质量浓度为40mg/L,为进一步研究文心兰中AP1基因的功能奠定基础。
- 武振江刘佳崔波叶永忠
- 关键词：文心兰遗传转化体系
- 蝴蝶兰Rubisco活化酶基因PhRCAα的序列特征及在低温胁迫下的表达分析被引量：5
- 2016年
- 为研究蝴蝶兰Rubisco活化酶基因(RCA)及其在低温胁迫下的响应机制,本研究利用RT-PCR及RACE技术从蝴蝶兰叶片中克隆了一个Rubisco活化酶基因PhRCAα的c DNA序列(登录号KU187968)该基因全长1 642 bp,编码473个氨基酸,包含P-loop_NTPase超家族结构域,预测其成熟蛋白的分子质量为46.16 k D,等电点为5.73,属于RCA基因的α亚基。实时荧光定量PCR分析显示,在13℃/8℃的昼夜温度条件下,蝴蝶兰PhRCAα基因的转录表达在处理3 d、6 d、9 d和15 d时明显下降,恢复正常温度条件后,该基因的表达升高;在4℃低温条件下,PhRCAα基因的转录表达在处理0.5 h、1 h和2 h内逐渐升高,而在处理4 h时其表达量下降,一直到低温处理48 h时,其表达量维持在较低水平。结果表明PhRCAα对驯化低温(13℃/8℃)和冷胁迫(4℃)具有不同的响应机制,PhRCAα对短期的冷胁迫有一定的防御作用。
- 袁秀云许申平王洁琼崔波
- 关键词：RUBISCO活化酶低温胁迫
- 蕙兰CfMADS1基因的克隆及其时空表达特性被引量：5
- 2015年
- 【目的】对蕙兰CfMADS1基因cDNA全长进行克隆和时空表达特性研究,为研究成花相关基因的功能提供参考。【方法】以蕙兰萼片cDNA为模板,利用反转录RT-PCR和RACE的方法,克隆获得CfMADS1全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。以蕙兰各时期的器官组织为材料,利用荧光定量PCR进行该基因的时空表达分析。【结果】成功克隆了CfMADS1基因(GenBank登录号为KC148540),其cDNA序列全长1 061bp,开放阅读框长744bp,编码247个氨基酸,分子式为C1 244H2 040N370O377S9。其编码的氨基酸序列与AP1/FUL亚家族中金钗石斛MADS1具有较高的同源性(85.43%),与AP1/FUL转录因子亚家族中的蛋白聚为一类。该基因编码蛋白没有明显的信号肽和跨膜域,极可能位于细胞核内,具有MADS保守域(1-61aa)和相对保守的K区(87-178aa),而且在C末端具有AP1/FUL特征基序(LPPWML),二级结构中α-螺旋所占比例较高(55.63%),三级结构与月季、水稻和水仙MADS1蛋白结构非常相似。该基因在盛花期叶中表达最强烈,花蕾期叶、葶、蕾及营养期叶、盛花期葶中表达较为强烈,子房和营养期根中表达较弱,其余器官组织中表达痕量。【结论】从蕙兰萼片中克隆得到了CfMADS1cDNA全长序列,CfMADS1与蕙兰的成花诱导、花发育以及果实形成有关。
- 田云芳袁秀云蒋素华马杰苏金乐崔波
- 关键词：蕙兰
- 萼脊兰SeAP1-like基因的克隆与表达载体构建被引量：4
- 2015年
- 根据NCBI网站上萼脊兰AP1-like全长基因序列设计引物,采用RT-PCR法从萼脊兰花瓣中扩增Se AP1-like基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的萼脊兰Se AP1-like基因为743 bp,编码247个氨基酸。将Se AP1-like基因插入p CAMBIA1304载体中,经PCR、双酶切鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体p CAMBIA1304-Se AP1。对Se AP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的二维结构。结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,该蛋白分子属于亲水性蛋白。二级结构分析表明,其包含57.49%的α螺旋、6.07%的延伸链、36.44%的不规则折叠。
- 蒋素华袁秀云王洁琼武振江张国付崔波
- 关键词：SE克隆
- 铁皮石斛DORCA基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2016年
- 为了研究铁皮石斛的光合特性,根据Rubisco活化酶(RCA)基因的保守序列设计兼并引物,采用RT-PCR和RACE方法从铁皮石斛叶中分离到一个RCA基因,命名为DORCA(GenBank登录号KT205841)。DORCA基因cDNA全长为1 724bp,包含1 317bp开放阅读框(ORF),编码438个氨基酸。系统进化分析显示,DORCA与马蹄莲ZaRCA(AAK25801.1)亲缘关系最近。生物信息学分析表明,DORCA与其他植物的RCA蛋白具有较高一致性,属于RCA的β亚基。DORCA蛋白具有定位于叶绿体的N端转运肽,2个保守的ATP结合结构域和多个磷酸化位点。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,DORCA基因在茎、叶中表达;在自然光周期条件下,DORCA基因在8:30时表达量最高,20:30时表达量最低,具有明显的光诱导表达特性。
- 崔波王洁琼宋彩霞袁秀云蒋素华梁芳刘佳叶永忠
- 关键词：铁皮石斛RUBISCO活化酶分子特征
- 蕙兰GAPDH基因的全长克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中已登陆的GAPDH基因的同源核苷酸保守序列,设计简并引物,采用RT-PCR的方法得到5个875 bp的片段,分别命名为CfGAPDH1-CfGAPDH5,GenBank登录号分别为JN177722-JN177726。同时结合RACE方法得到蕙兰GAPDH基因cDNA全长,命名为CfGAPDH(JX560732),该序列cDNA全长为1 496 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,173-1 195 bp),编码340个氨基酸,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的GAPDH蛋白有较高的同源性(80%以上)。系统进化分析表明蕙兰CfGAPDH基因核苷酸序列与墨兰GAPDH1、GAPDH2和春兰GAPDH1的同源性最高(99%),所编码的氨基酸序列与墨兰GAPDH2的同源性达100%。生物信息学分析推测,该基因编码的蛋白残基主要有两个卷曲螺旋区域,分别位于25和250位点附近,属于不稳定蛋白,亲水性较强,初步推断CfGAPDH是一个胞质型GAPDH,二级结构中的β转角所占比例较高(41.2%),三级结构与春兰和小麦非常相似。
- 田云芳蒋素华袁秀云崔波
- 关键词：蕙兰GAPDHRACE生物信息学
- 蕙兰α微管蛋白基因的克隆与序列分析
- 2014年
- α微管蛋白(TUA)基因常作为研究其他功能基因表达的内参基因。以TUA作为候选内参基因之一,依据GenBank已经公布的同源TUA基因的核苷酸保守序列,设计简并性引物,以蕙兰花蕾期的花葶为材料,提取总RNA,利用RT-PCR的方法,克隆了4条TUA基因片段。序列分析结果表明,4条TUA基因片段长度均为1 205bp,编码401个氨基酸,具有TUA基因标记位点:Tubulin subunits alpha,beta,and gamma signature特征信号序列(GGGTGSG)。各序列之间同源性高达99.63%,经Blast分析,与水稻同源性可达86%。利用DNAMAN等生物软件推断的氨基酸,与月季、玉米、牛筋草、小麦、看麦娘和水稻TUA基因所编码的氨基酸序列同源性达98%。研究中所得到的4个基因序列是TUA基因的同源片段,依次命名为CfTUA1、CfTUA2、CfTUA3、CfTUA4,GenBank登录号分别为JN177709、JN177710、JN177711、JN177712。
- 田云芳袁秀云崔波苏金乐
- 关键词：蕙兰克隆
- 1个兰花MADA-box基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2013年
- 为阐释兰科植物成花的分子调控机制,根据MADS-box基因保守序列设计简并引物,用RACE方法从蝴蝶兰花葶中克隆到1个MADS-box家族基因.序列和系统进化树分析表明,该基因与其他植物的MADS-box基因具有很高的同源性,属于AP1/FUL-like亚家族,命名为DtpsMADS2,GeneBank登录号为JQ065098.实时荧光定量PCR检测结果显示,DtpsMADS2在营养器官和生殖器官均有表达,表达量以盛花期花葶中最高;在根中,DtpsMADS2随着苗期、抽葶期和盛花期表达量逐渐降低,而花后期又升高;在叶中,DtpsMADS2在苗期表达量较高,随后在抽葶期下降,又随着盛花期和花后期表达量升高,DtpsMADS2在花葶中以抽葶期表达量最低,盛花期大幅度升高,花后期有所下降;而在花器官各轮结构中,DtpsMADS2只有少量表达.由此推断,DtpsMADS2的表达与开花进程呈正相关,主要参与开花调控,而对花器官的发育没有明显的决定和调控作用.
- 袁秀云蒋素华田云芳崔波
- 关键词：兰花系统树
