国家自然科学基金(81170769)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
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- 冬凌草甲素对脐静脉内皮细胞损伤的保护作用被引量：6
- 2014年
- 目的 研究冬凌草甲素（oridonin）对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用机制.方法 体外培养HUVECs,噻唑蓝法（MTT）确定oridonin作用的最佳浓度;将细胞分为空白对照组、高糖高脂＋oridonin预处理组（以下简称为oridonin预处理组,oridonin预处理细胞24 h）、高糖高脂组（高糖高脂的浓度为33.3 mmol/L葡萄糖＋500 μmol/L棕榈酸,处理48 h）,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察各组细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子仅（TNF-α）、白介素6（IL-6）的浓度,以观察细胞的炎症情况;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析HUVECs内TAp63、沉默信息调节因子1（Sirt1）mRNA的表达水平;Western blotting分析TAp63、Sirt1及凋亡相关基因磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的蛋白表达水平.两组间比较采用￡检验,多组间采用单因素方差分析.结果 Oridonin作用于HUVECs细胞24 h的最佳浓度为5 μmol/L.高糖高脂组HUVECs细胞内TAp63（mRNA及蛋白）、Sirt1 （mRNA及蛋白）、Bcl-2蛋白水平明显低于空白对照组（t=-22.50、-6.02、-16.22、-6.72、-7.71,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α、IL-6浓度明显高于空白对照组（t=14.34、12.59、17.37、17.90,均P＜0.05）.与高糖高脂组相比,oridonin预处理组HUVECs内TAp63 mRNA和蛋白、Sirt1mRNA和蛋白、Bcl-2蛋白表达明显升高（t=5.85、5.06、4.55、3.04、5.81,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α及IL-6的浓度明显下降（t=-7.11、-7.81、-10.51、-10.36,均P＜0.05）.结论 冬凌草甲素能够抑制高糖高脂诱导的HUVECs的凋亡,可能与其抑制高糖高脂诱导的炎症反应和（或）增加TAp63、Sirt1、Bcl-2的表达,且降低p-ERK的表达有关.
- 胡雪梅皇甫健刘洁李彩萍邓浩华吴玉文徐焱成
- 关键词：冬凌草甲素血管内皮细胞TAP63炎症
- 2型糖尿病患者外周血白细胞线粒体功能和游离mtDNA与脂肪组织胰岛素抵抗关系的研究被引量：6
- 2021年
- 目的探讨T2DM患者外周血游离mtDNA(线粒体DNA)和外周血白细胞线粒体功能对脂肪组织IR的影响。方法选取2017年1月至2019年3月于武汉大学中南医院内分泌科住院的新诊断未用药的T2DM患者80例(T2DM组),另选取同期健康人群64名为正常对照(NC)组。Seahorse XFe96检测仪检测两组白细胞线粒体功能。提取外周血mtDNA,RT-PCR检测mtDNA拷贝数,脂肪组织IR指数(Adipo-IR)评价脂肪组织IR水平,并检测血脂、BG和Ins、hsC-RP、TNF-α及活性氧簇(ROS)。结果与NC组比较,T2DM组外周血游离mtDNA、Adipo-IR升高(P<0.01)。随着Adipo-IR升高,外周血游离mtDNA水平逐渐升高,白细胞线粒体剩余呼吸功能和最大呼吸功能逐渐降低。外周血游离mtDNA与ROS、TNF-α、hsC-RP及Adipo-IR呈正相关(P<0.05或P<0.01)。外周血白细胞线粒体剩余呼吸功能和最大呼吸功能与ROS、TNF-α、hsC-RP呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,外周血游离mtDNA,外周血白细胞线粒体剩余呼吸功能、白细胞线粒体最大呼吸功能均为脂肪组织IR的影响因素。结论外周血白细胞线粒体功能和游离mtDNA水平可能影响脂肪组织IR。
- 杨帆杨帆毛红张旭艳
- 关键词：糖尿病
- LITAF基因对脂肪酸诱导HPA-v细胞胰岛素抵抗的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:通过RNA干扰技术特异性抑制LITAF基因,观察HPA-v人前脂肪细胞胰岛素信号通路的变化情况。方法:将HPA-v人前脂肪细胞和THP-1源巨噬细胞共培养,分为3组,分别为阴性对照组(Scramble组)、siRNA组和正常对照组(NC组),通过qRT-PCR,Western blot法检测LITAF,IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2的表达。结果:在软脂酸的刺激下Scramble组LITAF的表达较高于LITAF siRNA和IVC组;IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2在LITAF RNAi组较NC组和Scramble组明显提高(P<0.05)。结论:LITAF参与了软脂酸引起的脂肪细胞胰岛素抵抗,而脂肪酸作用于巨噬细胞的受体TLR4同样也是LITAF通路的细胞膜受体,软脂酸减弱了对胰岛素信号通路分子的抑制作用,因此LITAF参与胰岛素抵抗对糖尿病的发病起了至关重要的作用。
- 海德桑徐焱成
- 关键词：肥胖炎症因子胰岛素抵抗
- RIP140在姜黄素抑制MIN6细胞凋亡中的作用机制
- 2018年
- 目的 明确受体相互作用蛋白140 （RIP140）在姜黄素抑制胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡中的作用.方法 将MIN6细胞分为对照组、高糖高脂处理组、姜黄素干预组、O-RIP140-MIN6组（过表达RIP140细胞株）、GFP-MIN6组（对照细胞株）.除对照组外,其余各组细胞给予25 mmol/L葡萄糖＋ 500μmol/L棕榈酸处理24 h.姜黄素干预组与O-RIP140-MIN6组、GFP-MIN6组均在25 mmol/L葡萄糖＋500 μmol/L棕榈酸处理24h前给予20 μmol/L姜黄素预处理2h.流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western印迹检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、细胞外信号调节激酶（ERK）及其磷酸化水平.结果 与对照组相比,高糖高脂处理组RIP140蛋白表达、细胞凋亡率及ERK磷酸化水平均明显增加、Bcl-2表达下降（F=22.42～111.43,P均＜0.01）;与高糖高脂处理组相比,姜黄素干预组细胞凋亡率及RIP140蛋白表达均明显下降、ERK磷酸化水平明显降低,Bcl-2表达升高（F=22.42～111.43,P均＜0.01）;与GFP-MIN6组相比,O-RIP140-MIN6组细胞凋亡率明显升高（t=7.16,P＜0.01）、ERK的磷酸化水平升高（t=8.37,P＜0.01）,Bcl-2表达降低（t=5.88,P＜0.05）.结论 姜黄素通过下调RIP140的表达来抑制高糖高脂诱导的胰岛β细胞凋亡.
- 薛君力代喆曾姣娥徐焱成
- 关键词：姜黄素胰岛Β细胞细胞凋亡
- 冬凌草甲素对内皮细胞炎症因子表达的影响
- 2014年
- 目的研究冬凌草甲素（oridonin）对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症反应的影响。方法体外培养HUVECs，将细胞分为空白对照组、高糖高脂组（给予33μmol／L葡萄糖＋500μmol／L棕榈酸作用48h）、高糖高脂＋2．5μmol／L oridonin预处理组（给予2．5μmol／Loridonin预处理后，给予高糖高脂处理，以下简称2．5μmol／Loridonin组）、高糖高脂＋5μmol／L oridonin预处理组（给予5μmol／L oridonin预处理后，给予高糖高脂处理，以下简称5μmol／L oridonin组）。酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白介素6（IL-6）的浓度，以观察细胞的炎症情况。结果高糖高脂组HUVECs细胞上清中炎症因子TNF—α、IL-6浓度明显高于空白对照组（t=14．77、14．05，P均〈0．01）。与高糖高脂组相比，2．5μmol／L oridonin组、5μmol／L oridonin组HUVECs细胞上清中炎症因子TNF-α（t=-4．81、-9．07，P均〈0．01）及IL-6（t=-4．23、-10．06，P均〈0．01）的浓度明显下降。结论冬凌草甲素能抑制高糖高脂诱导的HU—VECs细胞炎症反应。
- 毛明莉胡雪梅徐焱成孙力石小丽陈静马培李竞
- 关键词：冬凌草甲素血管内皮细胞肿瘤坏死因子-Α白介素-6
- 过表达NR2E1对棕榈酸诱导的NIT1细胞凋亡及内质网应激的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究孤儿核受体NR2E1对棕榈酸(PA)诱导的胰岛β细胞凋亡及内质网应激的影响。方法建立过表达NR2E1小鼠胰岛细胞系NIT1细胞株,予500μmol/L PA处理24 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达变化,Western blot检测磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)的水平。结果过表达NR2E1能减少PA诱导的NIT1细胞凋亡率[(27.5±0.4)%vs(11.9±0.4)%]和CHOP mRNA表达[(10.54±1.98)vs(3.03±0.49)],增加GRP78 mRNA表达[(3.28±0.20)vs(5.28±0.49)]和eIF2α磷酸化水平[(1.26±0.13)vs(1.67±0.06)](P<0.05)。结论过表达NR2E1能减轻PA诱导的胰岛β细胞凋亡,其机制可能与调节内质网应激有关。
- 熊小侃徐焱成尚桂莲邓浩华陈静石小丽孙力段晓文
- 关键词：棕榈酸胰岛Β细胞内质网应激凋亡
- 枸杞多糖对MIN6细胞增殖活性和凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的 研究不同浓度枸杞多糖对小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞增殖活性和凋亡的影响.方法 培养MIN6细胞,分为对照组、不同浓度枸杞多糖干预组,分别给予0,100,200,400 mg/L枸杞多糖干预24 h.噻唑蓝（MTT）法检测MIN6细胞增殖活性,流式细胞术检测MIN6细胞凋亡率,Western印迹分析磷酸化细胞外信号调节激酶（ERK）及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达.结果 与对照组相比,100、200 mg/L枸杞多糖干预组MIN6细胞增殖显著增加（P均＜0.01）,MIN6细胞凋亡显著受抑制（P均＜0.01）,而400 mg/L枸杞多糖干预组细胞增殖活性降低（P＜0.05）,MIN6细胞凋亡增加（P＜0.01）.Western印迹显示,与对照组相比,100,200,400 mg/L枸杞多糖干预组Bcl-2表达（F=65.26,P＜0.01）及磷酸化ERK水平（F=14.85,P＜0.01）均增加,而400 mg/L枸杞多糖干预组Bcl-2与磷酸化ERK表达下降（P均＜0.05）,200 mg/L枸杞多糖干预组与400 mg/L枸杞多糖干预组相比,Bcl-2与磷酸化ERK水平差异均有统计学意义（P均＜0.01）.结论 低浓度枸杞多糖可促进MIN6细胞增殖,减少MIN6细胞凋亡,而高浓度枸杞多糖作用相反,其机制可能与ERK信号通路有关.
- 戚筠尚桂莲邹润梅徐焱成
- 关键词：枸杞多糖MIN6细胞细胞增殖
- 受体相互作用蛋白140对吡格列酮改善胰岛β细胞糖脂毒性损伤的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨过氧化物酶增殖活化受体-γ(PPAR-γ)激动剂吡格列酮对胰岛β细胞糖脂毒性损伤的保护及受体相互作用蛋白140(RIP140)在其中的介导机制。方法将胰岛β细胞株MIN6细胞分为NC组、高糖高脂组、吡格列酮干预组。稳定过表达RIP140的MIN6细胞(O-RIP140-MIN6)和过表达绿色荧光蛋白(GFP)的MIN6细胞(GFP-MIN6)。分别予高糖高脂(25 rmmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸)和/或10/μmol/L吡格列酮干预。利用MTT分别检测各组细胞增殖率、流式细胞仪检测凋亡率、RT-PCR检测RIP140 mRNA、Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平及黄嘌呤氧化酶法检测超氧化合物歧化酶(SOD)含量。结果 NC组、高糖高脂组及吡格列酮干预组MTT吸光值分别为:24 h(1.80±0.04)、(0.95±0.04)及(0.97±0.03);48 h(2.70±0.11)、(1.04±0.06)及(1.30±0.03)。NC组与高糖高脂组比较,差异有统计学意义(24 h:t=25.94,P<0.01,48 h:t=24.00,P<0.01)。高糖高脂组与吡格列酮干预组比较,差异有统计学意义(48 h:t=9.37,P<0.01)。各组间的24 h凋亡率分别为(2.93±0.66)%、(48.08±3.95)%(vs NC组,t=19.54,P<0.01)及(31.38±3.92)%(vs高糖高脂组,t=5.20,P<0.01)。Bcl-2相对表达量分别为(1.14±0.06)、(0.42±0.02)(vs NC组,t=20.52,P<0.01)及(0.86±0.04)(vs高糖高脂组,t=17.71,P<0.01)。RIP140表达量分别为(1.13±0.11)、(2.34±0.21)(vs NC组,t=9.69,P<0.01)及(1.63±0.13)(vs高糖高脂组(t=5.03,P<0.01);高糖高脂组与NC组比较,MDA[(10.13±0.47vs(5.00±0.26)nmol/mg,t=16.57,P<0.01]、SOD[(5.15±1.07)协(12.25±1.25)nmol/mg,t=7.51,P<0.01]比较,差异均有统计学意义。高糖高脂组与吡格列酮干预组比较,MDA[(10.13±0.47)vs(7.83±0.36)nmol/mg,t=6.77,P<0.01]、SOD[(5.15±1.07)v5(8.74±0.59)nmol/mg,t=5.16,P<0.01)差异有统计学意义。O-RIP140-MIN6和GFP-MIN6细胞分别给予高糖高脂及吡格列酮处理后,两组MTT吸光值:24 h(1.04±0.07)vs(1.40±0.16)(t=5.01,P<0.01),48 h(1.16±0.13)vs(1.
- 薛君力曾姣娥代喆彭湾湾徐焱成
- 关键词：吡格列酮胰岛Β细胞糖脂毒性
- 冬凌草甲素对棕榈酸诱导的内皮细胞损伤的保护作用被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨冬凌草甲素(oridonin)对棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,噻唑蓝法(MTT)确定冬凌草甲素作用的最佳浓度和时间;细胞分为空白对照组、棕榈酸组、棕榈酸+oridonin预处理组(以下简称"oridonin预处理组",棕榈酸浓度为500μmol/L),oridonin预处理24h,棕榈酸作用48h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,硝酸还原酶法检测各组细胞上清液中一氧化氮(NO)的浓度。结果:冬凌草甲素作用于HUVECs细胞的最佳时间是24h,最佳浓度为5μmol/L。与空白对照组比较,棕榈酸组HUVECs细胞凋亡率[(21.23±4.11)%vs(1.63±1.23)%,t=7.90,P<0.01]明显增加,上清液中NO的浓度[(114.67±17.01)μmol/Lvs(242.33±20.11)μmol/L,t=-8.396,P<0.01]明显降低。相对于棕榈酸组,oridonin预处理组HUVECs凋亡率明显降低[(7.77±2.57)%vs(21.23±4.11)%,t=-4.81,P<0.01],上清液中NO的浓度[(191.33±13.01)μmol/L vs(114.67±17.01)μmol/L,t=6.20,P<0.01]明显升高。结论:冬凌草甲素能抑制棕榈酸诱导的HUVECs细胞凋亡,并增加NO的浓度。
- 胡雪梅刘洁孙力石小丽陈静黄琦徐焱成
- 关键词：冬凌草甲素血管内皮细胞棕榈酸一氧化氮
- 桂皮醛抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应中的机制研究被引量：1
- 2019年
- 目的探讨桂皮醛(CA)在棕榈酸(PA)诱导的巨噬细胞(RAW264. 7)炎症反应中的分子机制。方法将RAW264. 7随机分为空白对照组(NC)、PA处理组(PA组)和不同浓度CA处理组(10μmol/L CA组、20μmol/L CA组、40μmol/L CA组)。MTT法检测不同浓度CA对RAW264. 7的影响,确定CA作用时间和浓度。PCR检测各组脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(LITAF),肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)mRNA表达,ELISA检测各组TNF-α和IL-6的蛋白水平,Western blot检测各组LITAF蛋白水平。结果与PA组相比,10μmol/L CA组、20μmol/L CA组和40μmol/L CA组均能显著抑制细胞内TNF-α、IL-6的mRNA和蛋白水平(P<0. 05或P<0. 01),且随着CA浓度增加,抑制炎症作用越强。与PA组相比,10μmol/L CA组、20μmol/L CA组和40μmol/L CA组LITAF m RNA和蛋白表达降低(P<0. 05)。结论 CA具有抗炎活性,其机制可能通过抑制LITAF信号通路,降低脂肪酸诱导TNF-α、IL-6表达,调控慢性低度炎症反应,为糖尿病及并发症提供可能的治疗选择。
- 杨帆杨帆毛红张旭艳
- 关键词：桂皮醛RAW264.7细胞炎症反应
