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纳米材料PEG-PEI介导双基因促体外拟神经细胞凋亡的作用被引量：3: 2012年; 目的探讨新型纳米材料PEG-PEI介导的双基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL在体外对拟神经细胞模型(神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞)的联合杀伤作用。方法将PEG-PEI介导的联合基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL转染SH-SY5Y细胞后,采用MTT法观察其对SH-SY5Y细胞的杀伤作用,荧光显微镜下观测以及流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞凋亡率及FPEG-PEI的转染效率。结果 N/P=15时PEG-PEI转染两种目的基因中单一基因的细胞凋亡作用最强(P<0.01);两种基因联合转染SH-SY5Y细胞时的细胞凋亡率为77%,较单一基因转染的细胞凋亡率提高了27%(P<0.01)。结论 CD-5-FC和TRAIL基因在体外联合转染对SH-SY5Y细胞的杀伤作用较单一基因更强;PEG-PEI可以作为神经细胞基因靶向传输的载体行神经系统疾病基因治疗的体内实验研究。; 梁兵袁芳殷建瑞蒲蜀湘解龙昌高庆春高聪; 关键词：体外转染基因治疗细胞凋亡

Y-39983在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用研究: 2013年; 目的探讨Rho-ROCK信号途径与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的关系及Y-39983在EAE中的作用。方法动物被分为对照组(健康Lewis鼠)、EAE模型组及干预组,每组各30只。EAE模型组及干预组建立EAE动物模型。干预组于Lewis鼠发病第1天起连续3d给予腹腔注射Y-39983(20μg/d),模型组同样于Lewis鼠发病第1天起连续3d给予腹腔注射生理盐水(20μg/d)。比较各组平均临床评分、发病高峰期持续时间及复发率;采用电镜观察法、HE染色、搔洛花青髓鞘染色、APC免疫荧光染色法观察各组脑组织病理变化;采用蛋白免疫印迹法检测各组蛋白脂蛋白(PLP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)及3-环腺苷酸-3-磷酸二酯酶(CNPase)等髓鞘蛋白分子及肌球蛋白轻链磷酸酶(p-MLC)、脑衰反应调节蛋白(CRMP-2)及LIM激酶2(LIMK2)等Rho激酶(ROCK)底物蛋白含量的变化。结果干预组平均临床评分(1.076±0.682)、发病高峰期持续时间〔(3.7±1.35)d〕、疾病复发率(37.5%)均低于EAE模型组〔分别为4.229±1.017、(5.3±1.46)d、46.67%〕(P<0.05)。干预组中脑组织中炎性反应及髓鞘脱失现象均较EAE模型组改善;脑组织中ROCK底物蛋白p-MLC、CRMP-2及LIMK2含量干预组较EAE模型组降低,髓鞘相关蛋白PLP、MBP及CNPase含量干预组较EAE模型组升高(均P<0.05)。结论 Y-39983可改善EAE临床症状,其可能作用机制为抑制ROCK激活,减少破坏轴突生长的底物蛋白生成,促进髓鞘蛋白形成及轴突再生。; 谢富华张姗姗林哲聪高聪熊旭明; 关键词：RHO激酶轴突再生实验性变态反应性脑脊髓炎

A Novel Fluorescence Probe 9-(4-(1,2-diamine)benzeneN^1-phenyl)acridine for Nitric Oxide Determination: 2014年; A novel fluorescent probe 9-（4-（1,2-diamine）benzene-N1-phenyl）acridine（DABPA） was synthesized for the detection of nitric oxide（NO） and characterized by IR, 1H-NMR and EI-MS spectroscopy. Based on a photoelectron transfer mechanism, the fl uorescence intensities of DABPA were investigated with the different concentrations of NO. Under the optimal experimental conditions, the fl uorescence intensity of DABPA had a good linear relationship（R2=0.9977） with NO concentration in the range from 1×10-7 to 1.5×10-6 mol/L with a detection limit of 1×10-8 mol/L. The cytotoxicity induced by DABPA was evaluated by the MTT（3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5diphenyl tetrazolium bromide） assay for biological application. Furthermore, the probe DABPA had also been successfully applied to real-time image NO produced in PC12 cells in the presence of L-arginine.; 丁莉芸袁芳HUANG LanfenHUANG JunLIU Xiaofang梁兵

三种非病毒载体对神经母瘤细胞进行转染的效果比较: 2012年; 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,研究Lipofectamine2000、改良纳米材料CS(N/P=10)和纳米粒子PAMAM(N/P=20)介导的基因导入系统对神经母瘤细胞SH-SY5Y的毒性及基因转染效率,为神经系统疾病的基因治疗奠定基础。方法制备Lipofectamine2000、CS和PAMAM与质粒DNA(pDNA)的复合物,分别转染在体外培养的人胚肾细胞Hek293和SH-SY5Y,利用噻唑蓝(MTT)比色实验比较三种载体的细胞毒性作用、用激光共聚焦显微镜观察转染后的细胞形态、倒置荧光显微镜检测转染细胞EGFP表达强度、流式细胞仪检测转染效率。结果①Lipofectamine2000、CS和PAMAM转染细胞存活率在Hek293细胞分别为73.09%、73.69%、69.24%,三者比较无显著差异;在SH-SY5Y细胞分别为67.69%、61.71%、42.92%,前两者均显著高于后者(P均<0.05)。②Hek293细胞经Lipofectamine2000和CS与pDNA的复合物分别转染后,细胞形态均未发生明显改变,保持梭状生长;而PAMAM/pDNA复合物转染后,细胞发生皱缩,呈圆形分布生长。经三种载体转染后的SH-SY5Y细胞均发生形态改变,其中PAMAM/pDNA复合物转染者形态改变程度相对较大。Hek293细胞和SH-SY5Y细胞中,均以Lipofectamine2000/pDNA复合物转染者EGFP表达强度最大,其次为CS/pDNA复合物、PAMAM/pDNA复合物转染者。④Lipofectamine2000、CS和PAMAM的转染效率在Hek293细胞分别为60.9%、45.2%、42.7%,前者显著高于后两者(P均<0.05);在SH-SY5Y细胞分别为25.3%、19.2%、8.9%,前两者均显著高于后者(P均<0.05)。结论 Lipofectamine2000为目前最适于神经系统疾病基因治疗研究的非病毒载体;改良后的新纳米材料CS毒性比PAMAM小、转染效率比PAMAM高,有望在神经系统疾病研究中得到进一步运用。; 高聪李威梁兵袁芳谢富华林哲聪; 关键词：阳离子脂质体新型纳米材料 SH-SY5Y细胞基因转染效率

两种非病毒载体介导microRNA转染的对比: 2014年; microRNA作为核酸类药物，在细胞和生物体内存在稳定忡差，半哀期短，转染效率低，靶阳性差[1]，故转染过程需要高效、高安全性的载体。Lipofectamine是常用的转染脂质休，可与DNA形成复合物，有较强的转染能力。聚乙烯、舷胺（p0Iyethyleneimine，PE!）属掰I离子聚合物，在休内外均有较高的转染效率，不良反应较低心[1]。选择适合的小分子RNA基因载体对其后续研究至关重要。; 高聪黄莉梁兵袁芳龙友明郑扬波陈梦宇; 关键词：RNA转染 LIPOFECTAMINE MICRORNA 小分子RNA 转染效率离子聚合物

雷公藤多苷联合地塞米松对EAE中TLRs/NF-κB信号通路的作用: 目的:探讨雷公藤多苷联合地塞米松对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果及其作用途径。方法:所有实验动物被分为空白对照组、EAE组、治疗组1(地塞米松)和治疗组2(雷公藤多苷联合地塞米松)。比较各组平均临床评分;分...; 谢富华熊旭明梁兵林哲聪张珊珊; 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎 TOLL样受体雷公藤多苷; 文献传递

3种不同类型基因导入系统转染类神经元细胞的效率比较被引量：3: 2012年; 目的应用3种不同类型基因导入系统携带能表达绿色荧光蛋白的pAAV-EGFP质粒转染两类神经元细胞株,并对细胞毒性和转染效果进行比较。方法 LipofectAMINE 2000、聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI,相对分子质量为25×103)及该课题组合成的PEI-聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)4.6在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞和C6胶质瘤细胞中的转染效果,通过MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜荧光观察法和流式细胞仪法检测转染效果。结果 MTT检测发现,在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的细胞存活率为83%,比PEI(70%)和LipofectAMINE 2000(73%)的细胞存活率要高(P<0.05);但Lipo-fectAMINE 2000和PEI的细胞存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05);在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中的检测结果与C6胶质瘤细胞类似。倒置显微镜观察发现,在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的细胞荧光表达效果比LipofectAMINE2000和PEI要好;而在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中,LipofectAMINE 2000的荧光表达效果比另外两种复合物的效果好,同时PEG-PEI 4.6的荧光表达效果比PEI要好。流式细胞仪检测发现在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的转染效率最好,为23.2%;Lipo-fectAMINE2000其次,为16.9%;PEI最差,为12.6%,三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中则是LipofectAMINE 2000的转染效率最好,PEG-PEI 4.6其次,PEI最差,转染效率分别为22.3%、17.2%、10.6%,三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LipofectAMINE 2000和PEG-PEI 4.6都可作为目前神经系统基因转染的传输载体。; 梁兵袁芳杨宁殷建瑞蒲蜀湘解龙昌高庆春高聪; 关键词：神经胶质瘤神经母细胞瘤脂质体转染

雷公藤多苷联合地塞米松对EAE中TLRs/NF-κB信号通路的作用被引量：3: 2012年; 目的:探讨雷公藤多苷联合地塞米松对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果及其作用途径。方法:所有实验动物被分为空白对照组、EAE组、治疗组1(地塞米松)和治疗组2(雷公藤多苷联合地塞米松)。比较各组平均临床评分;分别采用实时定量RT-PCR和免疫组化法检测不同组别脑组织中TLR4和TLR9mRNA和蛋白含量,免疫组化法检测NF-κB p65蛋白的表达;采用ELISA法检测外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的变化。结果:各治疗组平均临床评分较EAE组均降低(P<0.05);治疗组2较治疗组1平均临床评分降低(P<0.05)。在发病高峰期,EAE组TLR4和TLR9 mRNA及蛋白表达较空白对照组增高,而各治疗组较EAE组降低(均P<0.05);EAE组NF-κB p65阳性表达率较各治疗组升高(P<0.05);各治疗组炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量较EAE组降低(P<0.05)。治疗组2与治疗组1比较,上述各指标差异显著(均P<0.05),且雷公藤多苷与地塞米松具有交互作用(F=75.749,P<0.01)。结论:TLRs/NF-κB信号通路可能参与了EAE的发病过程;雷公藤多苷联合地塞米松具有明显改善EAE临床症状的效果,其可能通过抑制TLRs/NF-κB信号通路发挥抗炎及免疫抑制双重疗效。; 谢富华熊旭明梁兵林哲聪张珊珊; 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎 TOLL样受体雷公藤多苷

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