国家自然科学基金(30771010)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：杨俊伟闻萍王晓华方丽江蕾更多>>
- 相关机构：南京医科大学第二附属医院江苏省人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 红细胞生成素对肾小管上皮细胞纤连蛋白表达的影响被引量：1
- 2009年
- 重组人红细胞生成素（rhEPO）是纠正肾性贫血的有效药物。随着该药在治疗慢性肾脏病（CKD）患者贫血中的推广使用，其对CKD患者肾组织结构与功能的影响亦日益受到关注。rhEPO是否参与并造成肾脏组织结构的变化，影响肾衰竭的进展，对于应用rhEPO的CKD患者具有十分重要的意义。因此，我们通过观察rhEPO对肾小管纤连蛋白（FN）表达的影响，探讨rhEPO对机体肾组织可能产生的生物学效应。
- 闻萍方丽张飞飞周书琴王晓华刘佳杨俊伟
- 关键词：重组人红细胞生成素肾小管上皮细胞RHEPO肾性贫血
- 高糖诱导足细胞发生上皮-间叶细胞转分化被引量：4
- 2009年
- 目的通过观察高糖是否引起小鼠足细胞发生上皮-间叶细胞转分化现象，探讨糖尿病肾小球损伤的可能机制。方法以小鼠永生化足细胞株为研究对象，予不同浓度葡萄糖（12．5、25、50mmol／L）处理该细胞36h，并设低糖（5．6mmol／L）和甘露醇（50mmol／L）处理组为对照组。采用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光染色方法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、迁连蛋白（FN）、CD2相关蛋白（CD2AP）和Wihns’肿瘤1基因（WT-1）蛋白的表达。结果低糖（5．6mmol／L）和甘露醇（50mmol／L）处理条件下小鼠足细胞表达WT-1、CD2AP，基本不表达α-SMA和FN；而予不同浓度葡萄糖处理36h后，足细胞中α-SMA和FN表达水平呈剂量依赖性上调（P〈0．05）。间接免疫荧光染色结果也显示，与低糖组相比，高糖组中α-SMA阳性的足细胞比例显著增加（P〈0．05）。同时，蛋白免疫印迹结果还表明高糖可呈剂量依赖性方式下调WT-1和CD2AP的表达（P〈0．05）。结论在高糖条件下，足细胞发生向间叶细胞表刑的转分化可能是引起足细胞功能失调，进而引起糖尿病肾小球损伤发生的作用机制之一。
- 柏凤俞伟男闻萍王晓华方丽曹红娣杨俊伟谭若芸
- 关键词：足细胞肾小球高糖
- 血管紧张素Ⅱ参与肾小管上皮细胞转分化的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:本文通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)影响肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用,以及和转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)作用的关系,探讨AngⅡ参与肾小管间质纤维化的作用机制。方法:以人肾小管上皮细胞株(human kidney cell)HKC细胞为研究对象,采用蛋白印迹等方法,观察AngⅡ(10-9、10-8、10-7、10-6mol/L),及其与TGF-β1共同作用对该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响。明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)的变化,Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力。结果:①单独应用AngⅡ不能够造成HKC细胞E-cadherin表达的变化,也不能诱导α-SMA表达,但是却能上调FN的表达;②与TGF-β1共同作用时能够加强TGF-β1影响E-cadherin,α-SMA和FN表达的作用;③AngⅡ能够增加HKC生成MMP-2和MMP-9;④AngⅡ能够(10-7和10-6mol/L)增加HKC细胞迁移至Boyden小室膜下侧面的数目。结论:①AngⅡ可以参与EMT过程,但不是导致EMT的关键因素;②AngⅡ能够以协同的方式参与TGF-β1导致的EMT,可能以此方式加重肾小管间质的纤维化。
- 高雯狄佳闻萍江蕾熊明霞杨俊伟
- 关键词：转化生长因子-Β1转分化纤维化
- 高糖通过转化生长因子β1-Smad信号传递途径诱导肾小管上皮细胞转分化被引量：11
- 2008年
- 目的通过观察高糖对肾小管上皮细胞转分化（EMT）的作用，探讨其与转化生长因子131（TGF-131）的关系及糖尿病肾病肾小管间质纤维化的发病机制。方法以人肾小管上皮细胞株HKC细胞和高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株为研究对象。蛋白印迹法检测高糖（葡萄糖浓度分别为25和50mmol／L）对α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）和纤连蛋白（FN）表达的影响。酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF-1l的水平。Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力。抗TGF-β1抗体中和实验分析高糖对肾小管EMT作用及与TGF-β1的关系。结果持续的高糖作用（96h）能够导致HKC表达α-SMA蛋白，其中25和50 mmol/L的葡萄糖分别增加表达α-SMA 2．8倍和8．2倍；降低E-cadherin的表达；刺激合成FN。25和50mmol／L的葡萄糖刺激HKC 12h后，细胞培养上清液中TGF-β1浓度分别为（408．5±198．6）和（939．3±311．8）ng／L，呈剂量依赖性。抗TGF-βl抗体能够显著抑制高糖导致的HKC高表达α-SMA蛋白和FN及降低E-cadherin表达的作用。高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株在高糖的持续作用下，不能表达α-SMA和FN蛋白，E-cadherin也未见降低。细胞迁移实验表明，25和50mmol／L高糖能够增加HKC迁移至Boyden小室膜下侧面的细胞数[（12．4±3．7）和（18．6±4．4）细胞／HP）]，与正常对照组[（3．0±0．8）细胞／HP]差异有统计学意义（P〈0．01）。抗TGF-β1多克隆抗体能够部分抑制高糖（50mmol／L）造成的HKC细胞向Boyden小室膜下侧面的迁移[（11．9±5．2）细胞／HP]。高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株在高糖培养条件下迁移至Boyden小室膜下侧面的细胞数[（4．3＋1．2）细胞／HP]与正常对照组差异无统计学意义。结论高糖能够诱导肾小管EMT，此作用与高糖刺激该细胞合成TGF-β1有关，阻止Smad信号途径能够拮抗TGF-β1介导的肾小管EMT的作用�
- 张飞飞潭若云熊明霞王晓华方丽樊伟王笑云杨俊伟
- 关键词：转化生长因子Β肾小管SMAD上皮细胞转分化
- 重组人红细胞生成素影响系膜细胞生长与纤维连接蛋白表达的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的通过观察重组人红细胞生成素(rhEPO)影响肾小球系膜细胞生长,以及表达纤维连接蛋白(FN)的作用,探讨应用rhEPO后对肾组织可能产生的生物学效应。方法培养的大鼠肾小球系膜细胞在不同剂量(1、10、100和1000U.ml-1)rhEPO的作用下,细胞计数和蛋白浓度测定评价细胞是否肥大;蛋白免疫印迹法检测FN蛋白表达的变化。♂CD-1小鼠接受单次(n=8)腹腔注射rhEPO(1000 U.kg-1体重),注射后24 h处死并分离肾小球以检测其FN表达量的变化。结果①rhEPO能够增加系膜细胞蛋白质的含量,以100 U.ml-1工作浓度rhEPO的作用效果最为明显[(1.269±0.382)μg.10-3cellsvs(0.247±0.058)μg.10-3cells;P<0.01)];②rhEPO能够刺激系膜细胞上调FN蛋白的表达,与对照组相比,100 U.ml-1的rhEPO明显增加系膜细胞FN蛋白的表达,随着rhEPO浓度的增加,系膜细胞FN的表达进一步增多,呈剂量依赖性;③间接免疫荧光检测可见rhEPO作用系膜细胞24 h后,可见大量呈网状、条索状,甚至板块状FN蛋白分布于细胞间隙;④单次腹腔注射rhEPO后24 h的肾小球FN增加。结论rhEPO可以造成系膜细胞的肥大,同时诱导系膜细胞增加FN合成,提示rhEPO可以通过影响系膜细胞的功能造成肾小球功能的异常。
- 周书琴闻萍高雯王晓华方丽狄佳江蕾熊明霞张飞飞杨俊伟
- 关键词：红细胞生成素系膜细胞纤维连接蛋白
