黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11511197)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王秀丽李全凤王果元田野徐长庆更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目教育部留学回国人员科研启动基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SHP-2重组腺病毒的包装及对心肌细胞的感染被引量：2
- 2010年
- 目的采用HEK293细胞包装Ad-GFP-SHP-2和Ad-GFP-SHP-2-E76A并扩增Ad-GFP重组腺病毒并感染乳鼠心肌细胞。方法纯化两种载体;PacⅠ酶切线性化;线性化的载体转染入HEK293细胞进行包装;从病变的HEK293细胞分离重组腺病毒。利用重组的腺病毒感染乳鼠心肌细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果 PacⅠ酶切后,琼脂糖凝胶上显示有4.5 kb的条带;转染线性化的重组腺病毒载体入HEK293细胞中,反复冻融HEK293,其上清中含有重组腺病毒,当感染乳鼠心肌细胞感染复数为100时,感染效率大于90%。结论成功包装重组腺病毒,包装后的腺病毒可高效感染乳鼠心肌细胞。
- 张力李全凤李弘王丽娜金成艳董红岩王秀丽张丽景王果元徐长庆田野
- 关键词：SHP-2重组腺病毒心肌细胞
- SHP-2通过ERK和JNK通路调节PC12细胞应对NGF的细胞生存和凋亡被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF5h后分别用Westernblotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)表达变化。结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡。Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染pIRES-SHP-2野生型组p-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组p-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和pIRES-GFP组p-ERK表达明显低于pIRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组p-JNK表达高于NGF去除对照组;pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,pIRES-GFP-SHP-2野生型组低于pIRES-GFP空载体组。结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用。
- 祝晓春张力司云凤孙东升齐琦王果元董红岩王秀丽李弘王丽娜赵雅君李全凤徐长庆田野
- 关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶PC12细胞ERK通路JNK通路
