公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的建立被引量：2: 2012年; 目的建立慢病毒介导且稳定表达病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)蛋白的血管内皮细胞株。方法以质粒pvIL-6-Flag为模板,PCR扩增vIL-6基因,克隆至慢病毒载体p3DLV,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,构建含vIL-6基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经潮霉素筛选,获得稳定表达细胞株,western blot鉴定vIL-6蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因测序证实长度为615 bp的vIL-6基因成功克隆至慢病毒表达载体;重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为1.0×107 TU/mL。重组慢病毒感染EA.hy926细胞,经潮霉素筛选,形成生长形态良好的单克隆细胞株EA.hy926-vIL-6。western blot鉴定该细胞株可稳定表达vIL-6蛋白。结论建立了稳定表达vIL-6的EA.hy926细胞株,为进一步研究vIL-6的生物学功能及致病机制提供了细胞模型。; 许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾彭珊珊; 关键词：慢病毒血管内皮细胞

病毒白细胞介素6对甲基转移酶1表达的影响: 2013年; 目的:观察病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)对甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的影响。方法:vIL-6真核表达质粒转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测DNMT1表达的变化,比色法检测DNMT1的活性。结果:荧光定量RT-PCR和Western blot均表明vIL-6可显著促进DNMT1的表达,且vIL-6能上调DNMT1的活性。结论:vIL-6能诱导DNMT1的表达,可能是卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)致DNA甲基化异常,促进肿瘤发生发展的分子机制之一。; 徐建许雨乔潘世扬彭姗姗黄蕾孙瑞红; 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒

血浆DNA定量检测在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用被引量：6: 2010年; 目的通过监测晚期肺癌患者化疗过程中血浆DNA水平的变化,探讨其在疗效预测以及个体化治疗中的应用。方法采集35名晚期肺癌患者化疗前、后静脉血,用磁珠法提取血浆循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测,以100名体检健康者为对照。结果晚期肺癌患者化疗前血浆DNA平均含量为66.4（33.1-105.0）ng/ml,显著高于健康对照组血浆DNA平均含量22.4（16.2-30.0）ng/ml（P〈0.01）。一线药物化疗后,部分缓解组肺癌患者血浆DNA值较化疗前显著下降（P〈0.01）,且与病情稳定组、病情进展组患者血浆DNA值有显著差异（P均〈0.05）,而与健康对照组已无差异。生存曲线分析显示,化疗后血浆DNA〈50 ng/ml的患者生存率高于血浆DNA≥50 ng/ml的患者（P〈0.01）。结论血浆DNA的变化可敏感地反映晚期肺癌患者化疗疗效,在肿瘤个体化治疗中发挥重要作用。; 夏文颖丁清清潘世扬束永前徐婷陆雅春耿雁陈丹黄珮珺黄蕾徐建; 关键词：晚期肺癌化疗个体化治疗血浆DNA

病毒白细胞介素-6对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响被引量：2: 2012年; 目的观察病毒白细胞介素-6(viral interleukin-6,vIL-6)对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响。方法以vIL-6真核表达质粒转染293T细胞(转染组)为实验,空载体转染的293T细胞(空载体组)和未转染的293T细胞(未转染组)为对照,3组均采用Western blot法检测DNA甲基转移酶1的表达情况,甲基化特异性PCR法检测p16启动子区甲基化状态,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测p16基因的表达。结果转染组DNA甲基转移酶1蛋白表达较未转染组和空载体组增加;转染组p16基因启动子区出现甲基化改变;转染组p16mRNA表达量明显低于未转染组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05);转染组P16蛋白表达较未转染组和空载体组降低。结论 vIL-6可上调DNA甲基转移酶1表达,导致抑癌基因p16启动子区甲基化,抑制p16基因表达;vIL-6所致的DNA甲基化改变,可能是其致瘤机制之一。; 吴静许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾; 关键词：P16 卡波济肉瘤相关疱疹病毒

甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定: 2012年; 目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白。方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白。表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力。结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达。亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白。SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA。结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达。; 徐建潘世扬许雨乔孙瑞红黄蕾彭珊珊; 关键词：原核表达

全选清除导出

共1页<1>

江苏省自然科学基金(BK2009440)