黑龙江省海外学人科研资助项目(1053H013)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：凌虹李妍周海舟服部俊夫张唯哲更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学日本东北大学黑龙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：黑龙江省海外学人科研资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- V3环缺失的HIV-1 ADA株包膜表达载体构建及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建V3环缺失的HIV1ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,进行HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体的构建。得到的PCR产物经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,与pSM载体连接,构建HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失的表达载体(pSMADAΔV3),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体PCR产物,构建了其表达载体pSMADAΔV3,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR及基因测序结果显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环缺失的HIV1ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。
- 李妍周海舟服部俊夫凌虹
- 关键词：HIV-1
- 黑龙江省4例HIV-1感染者病毒包膜变异特征分析被引量：1
- 2007年
- 目的调查HIV-1从供体到受体中病毒包膜序列变异情况，预测结构及其抗原性的变异趋势，为进一步的表型特征和抗HIV免疫研究奠定基础。方法从4例HIV-1感染者外周血单个核细胞中提取DNA，设计跨病毒包膜的保守引物，进行PCR扩增，将扩增产物克隆至表达质粒载体，筛选阳性克隆进行序列测定。采用生物信息学方法对其进行编码氨基酸的变异性、系统发育以及包膜抗原特征进行分析和预测。结果共获得4个病人的8个有完整开放读码框的包膜表达载体。在8个克隆中，包膜糖蛋白gp120内变异程度大的区域分别为信号肽区、可变区V1／V2区、恒定区C2区内近V3区部分、V4和V5区。变异包括点突变、氨基酸插入或缺失等。系统树分析发现所获得病毒克隆为B′型并与云南分离株LTG0218距离最近。抗原性分析结果表明，除CD4结合区相对保守外，4株病毒在多处抗原表位中呈现较大变异性。结论构建并鉴定了4例HIV-1 B′亚型感染者的8个包膜克隆的包膜表达载体。表型预测其均为R5亲嗜性毒株。生物信息学技术分析预测结果表明从供者到受者发生了包膜蛋白变异。
- 张唯哲周海舟李妍王福祥马英骥凌虹
- 关键词：人类免疫缺陷病毒包膜抗原性
- HIV-1黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析被引量：4
- 2005年
- 目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV21)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34(Gen-Bank序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1B′亚型分离株RL42,同源性为91.52%。系统发育分析结果表明,该株为泰国B′亚型,与云南分离株RL42的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CX2CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV21阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B′亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。
- 周海舟李妍凌虹刘延成黄秉成服部俊夫
- 关键词：包膜
- Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定
- 2006年
- 目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。
- 张唯哲李妍周海舟服部俊夫凌虹
- 关键词：HIV-1修饰
