国家自然科学基金(31000091)
- 作品数：8 被引量：27H指数：4
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- 相关机构：南华大学邵阳医学高等专科学校长沙市中心医院更多>>
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- HO-1在免疫调节中的作用及其相关信号转导通路研究进展被引量：10
- 2011年
- 血红素氧合酶(Heme oxygenase,HO)-1在多种疾病研究中日益受到关注,其能降解血红素为CO、胆红素和亚铁离子。研究表明,HO-1及其代谢产物对宿主细胞具有抗炎、抗氧化、抗凋亡及抗增殖等作用。近年来,HO-1在免疫反应中具有日受重视,对其相关信号通路的研究也取得了突破性的进展,但是对其具体作用机制尚未完全阐明。因此,了解HO-1在免疫反应调节中作用及相关信号通路对预防疾病的发生具有重要的理论意义。
- 马小华游晓星吴移谋
- 关键词：血红素氧合酶-1免疫调节信号转导通路
- 鲍曼不动杆菌铁蛋白的抗氧化功能研究被引量：6
- 2014年
- 【目的】克隆鲍曼不动杆菌铁蛋白(Abferritin)基因,并研究其抗氧化功能。【方法】荧光定量PCR检测氧化应激下Abferritin基因的表达量,并将其基因克隆到表达载体p ET28a以构建重组质粒p ET28a-Abferritin,转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组菌BL/p ET28aAbferritin,IPTG诱导目的蛋白表达并利用镍柱亲和层析纯化该蛋白。比色法测定Abferritin蛋白的Fe2+氧化酶活性,自由基清除实验测定其抗氧化功能。菌落计数法观察重组大肠杆菌在H2O2应激条件下的存活率。【结果】Abferritin基因在氧化应激下表达增高。重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,通过Ni2+亲和层析纯化获得了Abferritin蛋白。该蛋白具有Fe2+氧化酶活性,能有效减少氧自由基的形成及提高大肠杆菌抵抗氧化应激的能力。【结论】氧化应激能诱导Abferritin基因表达上调,且该蛋白具有亚铁氧化酶活性和抗氧化功能。
- 谭潇李冉辉游晓星蒋传好黄泽智
- 关键词：鲍曼不动杆菌铁蛋白抗氧化活性
- 支原体巨噬细胞活化脂肽2经MAPKs和Nrf2途径诱导人单核细胞血红素氧合酶－1产生被引量：4
- 2014年
- 目的：探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（ MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（HO-1），并探讨其可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的，用不同浓度的MALP-2作用12 h，或一定浓度的MALP-2作用不同时间后，real-time PCR和Western blot分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达；比色法分析 HO-1酶活性情况；采用丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）特异性抑制剂（30μmol/L SB203580、PD98059和SP600125）预处理THP-1细胞30 min后加入5．0 ng/ml MALP-2共孵育细胞，Western blot检测HO-1的蛋白表达。提取MALP-2处理后的核蛋白及胞质蛋白，Western blot检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）在细胞核及胞质中的表达情况，并采用Nrf2 siRNA干扰Nrf2表达后，检测Nrf2和HO-1表达情况。结果 MALP-2能以浓度依赖性方式诱导人单核细胞系THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白质，同时，HO-1的酶活性也随着MALP-2浓度的递增而增强；30μmol/L MAPK特异性抑制剂SB203580、PD98059和SP600125处理THP-1细胞后，MALP-2诱导HO-1的表达量随之降低；5．0 ng/ml MALP-2能降低细胞质内Nrf2的表达水平，同时增加其细胞核内含量；且转染Nrf2 siRNA 后，HO-1的表达显著降低。结论 MALP-2诱导的HO-1表达受MAPK和Nrf2的调控。
- 马小华游晓星曾焱华刘良专朱翠明何军蒋传好吴移谋
- 关键词：血红素氧合酶-1MAPKS
- 无创正压通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重合并意识障碍被引量：6
- 2014年
- 目的探讨无创正压通气(NIPPV)治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者合并意识障碍的临床效果。方法选取AECOPD合并意识障碍患者63例,随机分为观察组与对照组,2组均给予常规治疗,观察组在常规治疗的基础上立即应用NIPPV治疗,首次NIPPV治疗时间在2 h以上,至少持续治疗3 d;对照组只采用常规药物治疗。对比2组治疗前及治疗后2、24、72 h心率(HR)、呼吸频率(RR)、格拉斯哥昏迷评分(GCS)、血气指标变化情况,及治疗前后痰液与血液中IL-8水平。结果 2组患者治疗前各项指标比较无统计学意义(P>0.05);观察组治疗2 h后,HR、RR、GCS、PaCO2较治疗前显著下降,pH、PaO2较治疗前显著升高,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗后24、72 h持续改善;对照组治疗2 h后各项指标与治疗前比较无统计学意义(P>0.05);治疗24 h后,各项指标较治疗前显著改善(P<0.05),但显著低于观察组。观察组治疗后痰液、血液中IL-8水平显著低于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NIPPV治疗AECOPD合并意识障碍,可迅速改善患者通气状态,治疗意识障碍。
- 李玉金游晓星
- 关键词：无创正压通气慢性阻塞性肺疾病急性加重
- 肺炎克雷伯菌HdeA蛋白的抗酸理化性质鉴定
- 2016年
- 肺炎克雷伯菌是一种常见的院内条件致病菌,通常定植在人体的呼吸道和胃肠道。但肺炎克雷伯菌是怎样在胃液的强酸条件下存活并进入肠道尚不十分清楚。本研究发现,酸性条件能够诱导肺炎克雷伯菌Kp Hde A基因表达上调。克隆Kp Hde A基因并将其转化大肠杆菌,获得可溶性的Kp Hde A蛋白并利用镍离子亲和层析纯化得到目的蛋白。光散射分析证明,酸性胁迫下,Kp Hde A蛋白能够减少酸诱导的醇脱氢酶聚集。荧光实验证明,酸胁迫可以诱导Kp Hde A蛋白的疏水基团暴露。圆二色谱实验证明,酸性条件能够诱导Kp Hde A蛋白形成无序结构。此外Kp Hde A蛋白的表达能提高大肠杆菌的耐酸能力。故推测,Kp Hde A蛋白具有分子伴侣活性,并在肺炎克雷伯菌抵抗酸胁迫中起重要作用。
- 刘艳刘丹游晓星蒋传好李冉辉
- 关键词：肺炎克雷伯菌
- 支原体巨噬细胞活化脂肽2诱导单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶1及其机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的：观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2， MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase，HO-1），并探讨其相应的调控机制，以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的MALP-2作用12 h， Western blot检测HO-1的表达；THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育，或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞，以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用；Western blot检测Akt磷酸化情况，并采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞，以证实PI3K参与HO-1表达。同时，分别采用EMSA和免疫荧光观察核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位，并采用Nrf2 siRNA干扰其表达后，Western blot检测HO-1表达。最后，采用siRNA干扰HO-1表达，或采用HO-1的激动剂钴原卟啉（ cobalt protoporphyrin ，CoPP）处理THP-1细胞，ELISA检测细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。结果 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1。且TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后，HO-1表达水平显著降低；此外，MALP-2能激活PI3K，PI3K抑制剂能抑制HO-1表达；MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位，PI3K抑制剂处理后，Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低。 RNA干扰Nrf2后，HO-1表达显著降低。沉默HO-1表达后，TNF-α和IL-1β分泌增高，而CoPP处理能进一步降低TNF-α和IL-1β水平。结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能受TLR2、6/PI3K/Nrf2通路调控。 HO-1的表达可在一定程度上负调控细胞因子过度分泌。
- 游晓星马小华刘良专曾焱华余敏君朱翠明何军蒋传好吴移谋
- 关键词：血红素氧合酶-1单核细胞
- 肺炎支原体MPN 668蛋白的克隆和表达与纯化
- 2013年
- 目的克隆表达与纯化肺炎支原体mpn 668蛋白。方法以Mp 129株基因组DNA为模板,PCR法扩增目的基因mpn 668,将其亚克隆至pGEX-6 P-1载体中。经鉴定后将其转化至表达菌E.coli BL 21中进行诱导表达。采用SDS-PAGE和蛋白质印迹等方法对表达产物进行分析鉴定并纯化GST融合蛋白。结果成功扩增出总长度为423 bp的mpn 668基因,所构建的原核重组质粒经PCR、双酶切以及测序鉴定与预期目的基因相符。SDS-PAGE显示,IPTG可诱导一分子量约为41 kD的可溶性GST融合蛋白,经GST·BindTMPurification Kit纯化后,纯度可达95%以上。结论本研究成功克隆表达出mpn 668融合蛋白,为下一步研究其功能奠定了基础。
- 陈列松游晓星刘良专曾焱华吴移谋
- 关键词：肺炎支原体MPN融合蛋白
- 香港海鸥菌HdeA蛋白的原核表达及活性研究
- 2015年
- 目的表达香港海鸥菌(Laribacter hongkongensis)分子伴侣蛋白HdeA并鉴定其保护功能,为解析其抗酸机制奠定基础。方法通过与相关蛋白进行同源性比较,在香港海鸥菌中找出编码HdeA的基因。以HdeA基因序列为基础,设计特异性引物,PCR扩增HdeA基因,并将其连接到表达载体pET28a,构建的重组质粒pET28a-HdeA转化大肠埃希菌BL21(DE3),得到重组菌BL/pET28a-HdeA,用IPTG诱导表达目的蛋白并利用镍柱亲和层析纯化HdeA蛋白,采用光散射法分析HdeA蛋白的保护功能。结果通过Blast分析,从香港海鸥菌中找到编码HdeA的基因。以合成的特异性引物扩增出约315bp的HdeA片段,连接到原核表达载体pET28a后转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导成功表达出HdeA蛋白,其分子质量单位为14.1ku,与理论值相符合。经His-tag亲和层析纯化,获得纯度较高的重组HdeA蛋白。光散射法检测分析HdeA蛋白能够减轻酸性条件下ADH蛋白聚集。结论纯化的重组HdeA蛋白在体外具有抗酸功能,为研究香港海鸥菌的抗酸机制奠定了基础。
- 钟轶游晓星李冉辉
- 关键词：香港海鸥菌克隆
