南方医科大学南方医院院长基金(2009C019)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张磊涛黄洪章李伟忠更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院中山大学更多>>
- 发文基金：南方医科大学南方医院院长基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TIMP-2基因过表达抑制成釉细胞瘤侵袭性生长的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)基因转染体外培养的人成釉细胞瘤(AM)细胞侵袭性生物学行为的改变,进一步研究MMP-2、TIMP-2与AM局部侵袭性的关系。方法 pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2质粒转染人AM细胞。空白对照组:不加任何处理因素;脂质体对照组:加入4μL Lipo-fectamine 2000和250μL Opti-MEMⅠ混合物;转染阴性载体对照组(P0):转染2μg阴性对照质粒pcDNA3.1(+)/GFP;实验组:分别转染不同浓度的质粒pcDNA3.1(+)/GFP-TIMPI 1μg(P1)、2μg(P2)、3μg(P3)。倒置相差荧光显微镜观察转染情况,流式细胞仪测定转染效率。明胶酶谱法检测基质蛋白酶-2(MMP-2)的活性。逆向明胶酶谱法检测TIMP-2的活性。RT-PCR分析MMP-2以及TIMP-2 mRNA的表达。Western blot分析MMP-2及TIMP-2蛋白的表达情况。三维培养观察分析细胞生长状况。Transwell微侵袭分析。结果与空白对照组比较,不同浓度质粒转染组的MMP-2均有不同程度的抑制,差异有显著性(P<0.05);72 h MMP-2抑制率为54.38%。TIMP-2的活性均有不同程度的增加,差异有统计学意义(P<0.05);72 h的TIMP-2增加率为43.75%。MMP-2蛋白表达水平P2明显低于P1、P3组,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,转染72 h后,不同质粒组的MMP-2蛋白表达水平的抑制率分别为16.1%、45.3%及39.6%。不同浓度组的TIMP-2蛋白表达水平的增加率分别为26.1%、61.3%及32.6%。在Transwell中培养72 h后,各对照组之间细胞的细胞计数差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,质粒转染组Transwell下室细胞的细胞数明显减少(P<0.05)。两组的相对侵袭抑制率分别为53.7%及46.9%。结论 TIMP-2基因转染AM细胞后,TIMP-2的mR-NA及蛋白表达增加,蛋白活性亦增加;MMP-2 mRNA表达量无明显改变,其蛋白表达量及活性降低。细胞的侵袭性被部分抑制,可能机制是TIMP-2基因过表达使MMP-2活性降低所致。TIMP-2及MMP-2以及两者的关系可能是影响AM局�
- 张磊涛李伟忠黄洪章
- 关键词：成釉细胞瘤基质金属蛋白酶组织抑制剂-2
