江苏省自然科学基金(BK2007091)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陈永昌任峰桑建荣刘加宝赵爽更多>>
- 相关机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶重组腺病毒载体的构建、鉴定及初步应用被引量：1
- 2010年
- 目的:构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法:将PKGⅡcDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKGⅡcDNA片段定向克隆到pAd/CMV/V5-DEST中构建pAd/CMV/V5-DEST-PKGⅡ(Ad-PKGⅡ)。重组质粒Ad-PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad-PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ的表达以及MAPK通路关键成分胞外信号调节激酶(ERK)活性的变化。结果:重组腺病毒滴度达5×109pfu/ml,蛋白质印迹法检测显示重组腺病毒感染CS54细胞后使其PKGⅡ表达明显增高;在BGC-823胃癌细胞株,PKGⅡ对EGF导致的ERK的激活有明显抑制作用。结论:成功构建了携带PKGⅡ基因的重组腺病毒,初步证明PKGⅡ对细胞增殖相关信号转导有抑制作用,为进一步研究PKGⅡ与肿瘤细胞发生发展的关系提供了基础。
- 屈睿刘加宝桑建荣任峰赵爽陈永昌
- 关键词：腺病毒载体DNA重组胞外信号调节激酶
- cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC-823迁移的影响
- 2010年
- 目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以携带PKGⅡ基因的腺病毒结构Ad-PKGⅡ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检测感染病毒后PKGⅡ的表达。用特异性PKGⅡ激活剂8-pCPT-cGMP作用感染病毒的细胞,通过Boyden槽迁移率、刮除迁移分析法分析PKGⅡ高表达和活性增高对Ras同源性蛋白A(Ras homologA,RhoA)激动剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的胃癌细胞迁移的影响。结果:胃癌细胞株BGC-823在感染Ad-PKGⅡ后高表达PKGⅡ,经cGMP类似物8-pCPT-cGMP激活后,使RhoA活化诱导的细胞迁移活动受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PKGⅡ能明显抑制胃癌细胞株BGC-823的迁移。
- 任峰高倩陶燕桑建荣杨小明范少华陈永昌
- 关键词：胃癌细胞细胞迁移
