国家高技术研究发展计划(2003AA205007)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 视网膜色素上皮细胞脱离体外培养条件后细胞保存液的研究
- 2007年
- 目的研究人视网膜色素上皮细胞(hRPE细胞)离体或脱离体外培养条件后,维持细胞活性、且延长细胞存活时间最适宜的液体。方法将5代以上hRPE细胞(本实验室保存)按常规冷冻、复苏培养于DMEM/F12培养基添加10%胎牛血清,EGF20μg/L和bFGF20μg/L条件下,至80%以上汇合,经胰蛋白酶消化,收集细胞、计数,置于6种不同保存液中(平衡盐液、Quinn’sadvantage medium、生理盐水、18氨基酸液、5%葡萄糖液和人工脑脊液),用Annexin V/FITC Kit染色,利用流式细胞术(FACS)检测细胞死亡或凋亡。采用2h至8h之间3个时间点,检测hRPE细胞在6种不同细胞保存液中的细胞状态。结果室温状态下,hRPE细胞30min内均发生坏死。4℃状态下,2h平衡盐液组凋亡率最低(0.9%);各组分别与平衡盐液组相比,显示人工脑脊液组与平衡盐液组之间存在显著差异;4h至8h,hRPE细胞凋亡率从26.74%上升至41.36%。各组总死亡率与凋亡率基本一致。结论4℃状态下,6种溶液中,平衡盐液是维持hRPE细胞脱离培养条件后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液。
- 孟书聪张君张小燕陆爱丽
- 关键词：视网膜色素上皮细胞细胞凋亡流式细胞术
