山东省自然科学基金(Y2004C29)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王凤斌赵翠香龙云张丽娟李宁更多>>
- 相关机构：潍坊医学院潍坊市坊子区人民医院重庆三峡医药高等专科学校更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带绿色荧光蛋白基因的APP695真核细胞表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建大鼠淀粉样前体蛋白（APP）695基因真核细胞荧光表达载体，进行细胞转染、表达，为阿尔茨海默病（AD）治疗药物的研究提供一种有效的细胞模型。方法设计并合成APP695基因的引物．以携带APP695基因的真核细胞表达载体pCB6质粒为模板，PCR扩增得到APP695基因全序列：将APP695基因连接到携带绿色荧光蛋白基因的载体pIRES2-EGFP上；应用酶切分析、PCR检测及DNA测序分析等鉴定所构建的真核细胞表达载体。结果以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知APP695基因大小相同，酶切也得到目的基因片段，测序结果显示与已知APP695基因序列相同。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白基因的APP695基因真核细胞表达载体,为AD治疗药物的研究提供了一种有效的分子工具。
- 梁静李宁王凤斌张丽娟鞠吉雨
- 关键词：阿尔茨海默病真核表达载体
- GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响
- 2012年
- 目的:观察三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响。方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P<0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P<0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P<0.01)。结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用。
- 王凤斌赵翠香张丽娟丁振禹
- 关键词：三羟基异黄酮APP695PC12细胞Β淀粉样蛋白
- 二甲基亚砜对PC12细胞形态学影响被引量：4
- 2008年
- 目的观察二甲基亚砜(DMSO)对PC12细胞形态学的影响。方法不同浓度的DMSO处理PC12细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变。结果0.5%,1.0%DMSO处理的PC12细胞形态没有明显的改变。经2.0%,3.0%和4.0%DMSO处理后,随时间延长,PC12细胞出现凋亡改变,细胞体积缩小变圆,凋亡小体形成。结论低于1.0%的DMSO对PC12细胞生长没有明显的毒性作用,形态结构没有明显改变。
- 张丽娟王凤斌梁静李宁
- 关键词：DMSOPC12细胞细胞形态学
- GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用。方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异。结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集;GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核凹陷明显减轻。细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P>0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P(0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制;GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P(0.01)。结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用。
- 赵翠香张丽娟龙云王凤斌
- 关键词：GENISTEINAPP695细胞形态增殖能力
- 三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组。应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P<0.01),CA分泌量均明显增加(P<0.01)。结论 GST可降低APP695MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能。
- 赵翠香龙云王凤斌张丽娟王亚南
- 关键词：GENISTEINAPP695PC12细胞细胞凋亡
- Genistein对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的观察Genistein(GST)对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用。方法将培养的PC12细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组。采用流式细胞术检测PC12细胞凋亡率。结果 APP695转染组与正常对照组比较,PC12细胞存活率明显降低,凋亡率明显升高(P<0.01)。GST干预组与APP695转染组比较,细胞存活率显著升高,凋亡率显著降低,其中1μmol/L GST组与APP695转染组比较,细胞凋亡率降低(P<0.05),5μmol/L GST组较APP695转染组细胞凋亡率则明显降低(P<0.01)。结论 GST对APP695基因转染引起的PC12细胞损伤有一定的保护作用。
- 龙云张丽娟王凤斌赵翠香
- 关键词：GENISTEINAPP695PC12细胞细胞凋亡
- 突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建被引量：3
- 2009年
- 目的构建携带突变型人淀粉样前体蛋白基因(APP695)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合载体。方法在NCBI上查找APP695的序列,设计引物。以pCB6质粒携带的野生型APP695序列为模板,以突变体引物扩增突变型APP695。将突变型APP695与pIRES2-EGFP连接并测序证实。结果经过酶切鉴定、PCR和DNA测序等方法,证实构建的pIRES2-EGFP/APP695突变型质粒载体序列正确。结论成功构建APP695-EGFP融合基因载体,为研究AD发病的分子机制和治疗时的药物筛选奠定基础。
- 张丽娟王凤斌成敏刘蓉
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白
- 三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用
- 2011年
- 目的探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组。应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15μmol.L-1和20μmol.L-1 GST处理组与5μmol.L-1和10μmol.L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01)。结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关。
- 王凤斌龙云王亚南丁振禹赵翠香
- 关键词：三羟基异黄酮APP695PC12细胞凋亡CASPASE-3
