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双亚基共表达重组人白细胞介素12真核质粒pEGFP-C1_IL-12的构建及表达被引量：2: 2009年; 目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人白细胞介素12双亚基目的基因(hIL-12,P35、P40)的真核表达质粒pEGFP-C1_IL-12,为进一步研究基因的定位、表达及hIL-12的抗肿瘤作用奠定基础。方法提取脂多糖(LPS)诱导后的人脐带血淋巴细胞总RNA,RT-PCR法扩增人白细胞介素12的双亚基P35和P40的全长cDNA,采用重叠PCR法连接两个亚基,双酶切双亚基片段及载体pEGFP-C1,T4DNA连接酶连接,重组质粒转化大肠埃希菌,挑取阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定证实质粒构建成功。借助脂质体将重组质粒转染人肝癌细胞系HepG2,通过荧光显微镜检测报告基因的表达,RT-PCR及Western blot法检测目的基因的表达。结果PCR及测序鉴定证实重组质粒pEGFP-C1_IL-12构建成功,RT-PCR及Western blot法证实重组质粒在HepG2细胞内正常表达。结论携带报告基因(GFP)和双亚基目的基因(hIL-12,P35、P40)的重组真核质粒pEGFP-C1_IL-12构建成功,并能在人肝癌细胞系HepG2中表达。; 夏向文李欣冯敢生郑传胜梁惠民张泽富; 关键词：白细胞介素12 重叠PCR

中药白芨提取物作为基因载体的制备与表征被引量：10: 2008年; 目的分离纯化并制备阳离子型白芨多糖,研究其表征,探讨其作为基因载体的可能性。方法经热水抽提,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,阴离子交换纤维素柱(DE-52)和凝胶柱(Sephadex G-100)色谱,分离纯化得白芨多糖,通过高碘酸钾氧化得到含醛基的还原性多糖,该还原性多糖与精胺在碱性条件下形成希夫碱式共轭物,经硼氢化钠还原得含伯胺基的阳离子型多糖,分别通过盐酸羟胺法和三硝基苯磺酸法测醛基与伯胺基的产量,并考察了氧化反应时间对反应产物的影响。进一步通过琼脂糖凝胶电泳检测该阳离子型多糖对基因的结合与保护作用。结果所提纯的白芨多糖为一种不含阳离子基团的非还原性多糖,通过胺化还原反应的方法可成功制备出含伯胺基的阳离子型多糖,红外光谱证实了多糖上伯胺基的存在,进一步的研究表明,该阳离子型多糖可以结合并保护质粒DNA。结论通过胺化还原反应方法制备的阳离子型白芨多糖,有望作为一种多糖基的多聚阳离子型基因载体在真核细胞基因转染中发挥作用。; 夏向文李欣冯敢生赵彦兵郑传胜; 关键词：白芨多糖基因载体

人白细胞介素12重组基因抗肿瘤作用的初步研究被引量：2: 2010年; 目的研究重组人白细胞介素12真核表达基因(pEGFP-C1_IL-12)在体内外的抗肿瘤作用。方法将pEGFP-C1_IL-12基因转染入体外培养的肝癌细胞HepG_2,MTT法检测肝癌细胞的增殖能力,半定量PCR法检测肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。进一步经动脉导入重组基因至VX_2移植性肝癌组织,观察与化疗栓塞联合应用时在体内对VX_2肝癌的生长的影响。结果在体外实验中,肝癌细胞的增殖能力及VEGF表达与对照组相比无显著性差异。在体内,基因治疗与化疗栓塞联合应用时,肿瘤生长速度明显减慢。结论重组基因pEGFP-C1_IL-12在体外并不表现出抗肿瘤作用,但在体内抗肿瘤作用明显,这种抗肿瘤作用可能并非重组基因表达产物的直接作用,可能是由间接途径介导的。; 郑传胜夏向文冯敢生李欣梁惠民梁斌; 关键词：白细胞介素12 化疗栓塞基因治疗

经介入途径中药白芨提取物作为基因递送载体的可行性研究被引量：4: 2009年; 采用合适的递送载体及恰当的途径将基因安全高效地转入靶细胞内是基因治疗成败的关键。白芨提取物制备的白芨载药微球，具有良好的缓释作用，其悬浮性、分散性及生物相容性好。据此，为进一步发挥白芨多糖的药物载体作用，开发一种新的适合于介入途径给药的基于白芨多糖的基因递送载体，; 夏向文李欣冯敢生郑传胜梁惠民柳曦任建庄; 关键词：白芨多糖提取物介入中药生物相容性基因治疗

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国家自然科学基金(30400108)