国家自然科学基金(31172379)
- 作品数：24 被引量：85H指数：5
- 相关作者：余树民曹随忠沈留红左之才马晓平更多>>
- 相关机构：四川农业大学雅安市妇幼保健院中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省学术和技术带头人培养资金四川省教育厅青年基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牦牛SPAG11基因克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)精子相关抗原11(Sperm-Associated Antigen 11,SPAG11)基因,并了解其分子结构特征,为进一步研究牦牛SPAG11生物学功能奠定基础。【方法】从牦牛睾丸中提取总RNA,RTPCR扩增并克隆SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,测序后进行生物信息学分析。【结果】克隆出牦牛SPAG11基因3个亚型:SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E,序列大小分别是351,408和261bp,分别编码117,129和80个氨基酸,其中SPAG11 D和SPAG11E序列包含1个完整开放阅读框(ORF),SPAG11C序列包含部分ORF。牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E核苷酸序列与黄牛(Bos taurus)相应序列相似性最高,而与黄牛β-防御素1相似性较低(<50%)。3个蛋白亚型均具有β-防御素家族基本特性,生物信息学分析显示其均含有磷酸化位点。【结论】成功克隆牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,明确了其编码蛋白的分子结构特征。
- 徐绮嫔王寒李计尚周金伟张于沈留红余树民彭广能曹随忠
- 关键词：牦牛Β-防御素生物信息学
- CRISPR/Cas9基因组编辑技术及其在动物基因组定点修饰中的应用被引量：26
- 2015年
- CRISPR/Cas系统是细菌和古生菌中抵抗外源病毒或质粒入侵的获得性免疫系统,利用CRISPR RNAs(cr RNAs)引导Cas核酸酶沉默入侵的核酸。通过分子生物学改造使Ⅱ型CRISPR/Cas系统成为一种高效的基因组定点修饰技术,并且比锌指核酸酶(Zinc-finger nucleases,ZFNs)和TALE核酸酶(Transcription activator like effector nucleases,TALENs)结构更简单,更容易设计和应用。文章主要介绍了CRISPR/Cas9系统成为高效基因组定点修饰技术的发展历程、Ⅱ型CRISPR/Cas的工作原理和改造过程以及在动物基因组定点修饰的应用,剖析了该技术存在的问题和现有改进方案,并与成功案例相结合展望了CRISPR/Cas9系统的应用前景,以期为动物性状改良和人类疾病动物模型的创立提供新思路。
- 周金伟徐绮嫔姚婧余树民曹随忠
- 关键词：人类疾病动物模型
- 性成熟前猪睾丸组织中印记基因DNA甲基化状态分析被引量：1
- 2017年
- 为探求性成熟前猪睾丸中印记基因DNA甲基化状态,以1、2、3月龄三元杂交猪睾丸实质组织为材料,在利用Me DIP-seq(甲基化DNA免疫沉淀测序技术)建立性成熟前猪睾丸全基因组DNA甲基化图谱的基础上,比对得到了8个已证实的猪印记基因甲基化状态。结果显示,8个印记基因DIRAS3、IGF2、IGF2R、MEST、NAP1L5、NNAT、PEG10、PLAGL1,在性成熟前猪睾丸组织中的甲基化水平均不高,表现为"非甲基化"或"部分甲基化";NNAT、PLAGL1启动子甲基化水平在1~3月龄间保持增长,NAP1L5、IGF2R启动子甲基化水平在1~2月龄下降,2~3月龄增长,DIRAS3、IGF2、MEST、PEG10 promoter甲基化水平在1~2月龄增长,2~3月龄下降;图谱中仅比对到4个基因的gene body甲基化状态,IGF2R、MEST gene body甲基化水平在1~3月龄保持下降,PLAGL1、PEG10 gene body甲基化水平在1~2月龄增长,2~3月龄下降。推测这8个印记基因在性成熟前猪睾丸发育过程中均具有一定活性,且DNA甲基化对印记基因发挥一定的调控作用。
- 陈曦杨芳李捷白利鹏李丹婷曹随忠沈留红余树民
- 关键词：DNA甲基化印记基因睾丸
- 犬骨髓间充质干细胞的体外分离培养及鉴定被引量：4
- 2017年
- 为了体外高效快捷地分离培养犬(canine)骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),实验分别用全骨髓差速贴壁法和密度梯度离心法对犬BMSCs进行分离培养,利用免疫组化和流式细胞术检测获得细胞的表面标志抗体,并用成骨和成脂方向的诱导分化等方法对其进行鉴定。结果表明,全骨髓差速贴壁法和密度梯度离心法都能成功培养出犬BMSCs,但后者相对前者获得的细胞经培养后其原代细胞分布更均匀,原代培养达到传代所需的时间更短,成活率更高;两种方法获得的P3和P8细胞的生长曲线基本保持一致;免疫组化和流式细胞术检测犬BMSCs表达CD105、CD90和CD29,但是不表达CD34和CD31;且能成功诱导为成骨细胞和脂肪细胞。证明采用全骨髓差速贴壁法和密度梯度离心法均能够成功分离和培养犬的BMSCs,而密度梯度离心法是一种较全骨髓差速贴壁法更适合犬BMSCs的分离方法。
- 李捷白利鹏陈曦杨芳沈留红曹随忠左之才任志华马晓平余树民
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)的构建及其在基因组定点修饰中的应用被引量：5
- 2013年
- 类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)是一种新发现的基因组定点修饰工具。TALENs由TALE蛋白及II型核酸内切酶Fok I组成,其中TALE由多个重复的氨基酸序列构成,对DNA序列的识别达到一个重复单元结合一个碱基的程度,它在结合Fok I内切酶后就形成了具有DNA定点修饰功能的TALENs。该文主要介绍TALENs的构建及其在基因组定点修饰中的应用。
- 周金伟王灵慧申义君余树民曹随忠
- 关键词：基因敲除
- 仔猪睾丸支持细胞的体外生物学特性研究被引量：7
- 2015年
- 为研究仔猪睾丸支持细胞生物学特性,以3~5周龄仔猪睾丸为材料,优化消化和差异贴壁方法,分离纯化支持细胞,研究其体外培养特性包括增殖活力、标志分子和细胞因子的表达。结果显示,先以0.25%胶原酶IV和0.1%透明质酸酶消化60 min,再以0.25%胰蛋白酶和0.1%DNase I消化20 min,有利于获得支持细胞;支持细胞接种后贴壁时间主要集中在3~5 h;纯化后细胞胞体宽大,呈梭形或不规则形;GATA4染色呈阳性,碱性磷酸酶染色呈阴性;RT-PCR结果表明,细胞表达GATA4、SOX9和INHB,不表达CYP17、3β-HSD和α-SMA;ELISA结果表明,细胞表达GDNF、LIF、CSF-1、EGF和FGF2,符合支持细胞的基本特征。
- 刘欢欢余树民夏娟孙成亮沈留红曹随忠左之才马晓平
- 关键词：支持细胞体外培养细胞因子
- 哺乳动物精原干细胞体外分离培养研究进展被引量：2
- 2014年
- 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)作为成体干细胞的一种,具有高度自我更新和分化潜能。近几年研究发现,SSCs的体外培养是表观遗传基础研究、精子发生机制深入探索以及治疗雄性不育的基础条件。本文根据国内外SSCs相关研究,对哺乳动物SSCs的生物学特性、体外分离培养和鉴定等作一综述,以期为哺乳动物SSCs和其他干细胞的长期体外培养以及建系提供一定的借鉴。
- 刘丹夏娟刘欢欢余树民
- 关键词：精原干细胞生物学特性体外培养
- 深Ⅱ度烫伤早期犬血液生理指标及四种细胞因子质量浓度的动态变化被引量：1
- 2014年
- 以中华田园犬为研究对象，用99口C多层纱布覆盖犬腰荐部多个面积为3cm。区域皮肤，制备深Ⅱ度烫伤模型，采集烫伤前和烫伤后第6、12、24和48小时血样和烫伤皮肤组织样品，检测血液生理指标和细胞因子IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的质量浓度。结果显示，烫伤后犬血液白细胞、中性粒细胞和单核细胞的浓度均显著升高（P〈0．05），烫伤后第24小时达到峰值，淋巴细胞的浓度显著降低（P〈0．05），烫伤后第12小时降至最低；犬血清和组织中IL-6、IL-10和TNF-α的质量浓度在烫伤后第6～24小时均显著高于烫伤前（P〈0．05），烫伤前后血清中IL-8的质量浓度未发生显著变化（P〉0．05），组织中IL-8的质量浓度烫伤后第24小时显著升高（P〈0．05）。结果表明，深Ⅱ度烫伤早期（48h以内）试验犬呈现全身性炎性反应特征，血清和烫伤组织中促炎／抗炎细胞因子水平不同程度升高。
- 余树民白欣左之才彭西王娅邓俊良甘梦
- 关键词：血液生理指标细胞因子
- 中药复方对免疫抑制模型小鼠细胞因子、免疫球蛋白及红细胞免疫黏附功能的影响被引量：16
- 2014年
- 【目的】评价自拟中药复方对免疫抑制小鼠血清细胞因子、免疫球蛋白和红细胞免疫黏附功能的影响。【方法】通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。试验组免疫抑制小鼠分别按20,10和5g/kg剂量灌胃自拟中药复方,同时设置模型对照组(灌胃等体积生理盐水)、健康对照组(灌胃等体积生理盐水)和黄芪多糖对照组(灌胃剂量66mg/kg),连续7d,试验第0,3,7天采集血样,用血细胞自动分析仪测定小鼠血细胞数,用酶联免疫吸附试验测定血清IL-2、IgG、IgM、IL-4和IFN-γ含量,并计算IL-4/IFN-γ,用红细胞C3b受体花环(C3b RR)及免疫复合物花环(ICR)试验分析红细胞免疫黏附功能。【结果】通过腹腔注射环磷酰胺(80mg/kg,1次/d,连用3d)成功建立了免疫抑制小鼠模型。所用中药复方和黄芪多糖可显著提高免疫抑制模型小鼠WBC,其中以10和20g/kg剂量中药复方效果显著;10和20g/kg剂量中药复方可显著提高免疫抑制模型小鼠血清中IgG和IgM含量,提高或恢复免疫抑制模型小鼠血清中IL-2含量,并可促进免疫抑制模型小鼠血清IL-4和IFN-γ含量、IL-4/IFN-γ、红细胞C3b RR率恢复至健康小鼠水平;所用中药复方和黄芪多糖对免疫抑制模型小鼠红细胞ICR率的影响不明显。【结论】自拟中药复方通过调控细胞因子和免疫球蛋白生成,对环磷酰胺介导免疫抑制模型小鼠的细胞免疫、体液免疫和红细胞免疫黏附功能发挥正向调节作用,其中以10g/kg剂量效果明显。
- 余树民甘梦左之才崔恒敏彭西王娅邓俊良
- 关键词：中药复方免疫抑制小鼠细胞因子免疫球蛋白红细胞免疫黏附功能
- 猕猴外周血液中多潜能调控因子Oct4、Nanog和Sox2基因的表达
- 2013年
- 采用半定量RT-PCR对采自幼体(2岁以内)、亚成体(2～5岁)和成体(5岁以上)猕猴共28份外周血样品进行分析。结果显示,幼体和亚成体猕猴所有外周血样品均转录表达Oct4、Nanog和Sox2基因,大部分成体猕猴外周血样品(8/12)表达Oct4、Nanog和Sox2基因,少数样品仅表达Oct4和Sox2(2/12)或Oct4和Nanog(1/12),1份样品不表达3个基因;同一年龄组内,Sox2表达水平均显著高于Oct4和Nanog(P≤0.05),幼体组Oct4和Nanog的表达水平没有显著性差异(P>0.05),亚成体组和成体组Oct4的表达水平均显著高于Nanog(P≤0.05);在不同年龄组间,Oct4和Nanog表达水平没有显著性差异(P>0.05),幼体组Sox2表达水平显著高于成体组(P≤0.05)。结果表明,在生理条件下Oct4、Nanog和Sox2基因在不同年龄段猕猴外周血中均转录表达,不同基因表达水平存在一定差异,随年龄增加这些基因表达量有降低的趋势。
- 余树民凌占业姚学萍曹随忠杨泽晓王印沈留红彭广能
- 关键词：猕猴外周血OCT4NANOGSOX2
