国家自然科学基金(30570730)
- 作品数：8 被引量：46H指数：5
- 相关作者：郭小梅陈光慧廖华赵丽周炜更多>>
- 相关机构：华中科技大学美国国立卫生研究院华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血管平滑肌细胞增殖信号转导通路与血管再狭窄防治被引量：8
- 2007年
- 上游激活蛋白(Ras)信号通路与血管再狭窄的发生有着十分密切的关系。雷帕霉素和紫杉醇等药物涂层支架主要通过抑制Ras下游的信号转导发挥抗细胞增殖作用。新基因M fn2可直接抑制Ras,其抑制点更高,效果更明显,因而可望用于研制基因涂层球囊与基因涂层支架,从而成为血管再狭窄等血管增殖性疾病基因治疗的新靶点。
- 廖华糜涛郭小梅
- 关键词：血管平滑肌细胞增殖信号传导血管再狭窄
- 腺病毒介导的线粒体融合素基因诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡
- 目的研究腺病毒介导的线粒体融合素基因(mitofusin-2,Mfn2)对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用携带大鼠Mfn2基因的重组腺病毒 Adv-rMfn2...
- 廖华陈光慧郭小梅
- 文献传递
- 腺病毒介导的线粒体融合素基因-2诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡被引量：10
- 2006年
- 目的研究腺病毒介导的线粒体融合素基因2(mitofusin2gene,Mfn2)对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)凋亡的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用携带大鼠Mfn2基因(rMfn2)的重组腺病毒Adv rMfn2GFP和含有绿色荧光蛋白基因的对照腺病毒Adv GFP分别感染球囊损伤动脉段,以磷酸缓冲液(PBS)作为未感染对照组,假手术组作为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测外源基因表达水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;Image Pro图像分析系统进行血管定量组织形态学分析。结果病毒感染后5d,免疫组织化学证实Adv rMfn2GFP组Mfn2蛋白表达水平明显;TUNEL染色显示,Adv rMfn2GFP组的VSMCs凋亡率明显高于PBS组和Adv GFP组,假手术组未见TUNEL阳性VSMCs(n=10,P<0.01);感染后21d,Adv rMfn2GFP组的血管内膜面积及内膜中膜面积比明显低于对照组(n=10,P<0.01)。结论高表达Mfn2基因可诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡。
- 廖华曹文静陈莉莉陈光慧郭小梅
- 关键词：线粒体融合素基因-2血管平滑肌细胞凋亡腺病毒科
- tMfn基因2对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:采用腺病毒介导的去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2(tMfn2)感染血管平滑肌细胞(VSMCs),研究其促VSMCs凋亡的作用及其相关的信号通路。方法:用携带大鼠线粒体融合素基因2(Mfn2)的腺病毒(Adv-Mfn2-GFP)和携带tMfn2基因的腺病毒(Adv-tMfn2-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦显微镜技术观察tMfn2和Mfn2的融合蛋白在细胞中的定位;细胞凋亡ELISA方法、TUNEL染色法研究Mfn2、tMfn2对VSMCs凋亡的影响;Western Blot方法研究tMfn2促进VSMCs凋亡的相关信号通路。结果:激光共聚焦显微镜成像技术证实tMfn2融合蛋白主要游离于细胞质内,而Mfn2融合蛋白主要位于线粒体外膜。采用ELISA方法证实Adv-tMfn2-GFP感染组促进VSMCs凋亡作用比Adv-Mfn2-GFP感染组更显著;Adv-tMfn2-GFP感染组TUNEL染色的凋亡细胞较Adv-Mfn2-GFP感染组明显增多(P<0.05)。Western Blot结果显示,与空白对照组相比,Adv-Mfn2-GFP感染组、Adv-tMfn2-GFP感染组对应的P-Akt条带明显减弱,且后者更显著(P<0.05)。结论:tMfn2由于去除了穿膜区序列,其表达产物主要游离于细胞质中,更易于通过Ras-PI3K/Akt信号通路,抑制Akt的磷酸化,促进VSMCs凋亡,且作用较Mfn2更明显。
- 糜涛赵丽郭小梅陈光慧
- 关键词：细胞凋亡腺病毒
- 去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因通过线粒体凋亡路径促进大鼠血管平滑肌细胞凋亡被引量：4
- 2009年
- 目的研究去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素2（tMfn2）基因对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的影响及其相关的信号通路。方法用携带tMfn2基因和线粒体融合素2（Mfn2）基因的重组腺病毒（Adv—tMfn2和Adv—Mfn2）感染VSMC。采用流式细胞术、细胞凋亡ELISA、TUNEL染色等方法检测tMfn2对VSMC凋亡的影响。Western blot分析磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）以及线粒体凋亡路径中B细胞淋巴瘤／白血病-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关的X蛋白（Bax）、有活性的天冬氨酸特异一半胱氨酸蛋白酶9（cleaved caspase-9）的表达变化。结果流式细胞仪检测和ELISA结果表明，tMfn2促VSMC凋亡的作用显著强于Mfn2，且呈时产依赖性[72h凋亡率分别为（79．2±0．2）％和（65．0±1．2）％，P〈0．01]。TUNEL染色发现tMfn2组的凋亡细胞明显多于Mfn2组（P〈0．01）。Western blot结果显示，tMfn2和Mfn2组中p-Akt水平均明显降低，但前者作用更显著（P〈0．01）。进一步检测线粒体凋亡路径中的相关蛋白，tMfn2组的Bax蛋白表达显著升高、Bcl-2蛋白表达显著降低，且cleaved caspase-9的活性明显增强，较Mfn2诱导凋亡的作用更强（P〈0．01）。结论与Mfn2相比，tMfn2促进VSMC凋亡的作用更强，其机制与抑制Akt磷酸化并激活线粒体凋亡途径有关。
- 赵丽周炜王四坤廖华张文娟陈光慧郭小梅
- 关键词：细胞凋亡腺病毒科
- 腺病毒介导的线粒体融合素基因-2感染促进大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡及其信号通路研究
- 目的应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(Mitofusion-2,Mfn2)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响,并探讨其相关的信号通路,阐明其分子作用机制。方法体外培养rVSMC...
- 刘成陈光慧郭小梅
- 文献传递
- Mfn2基因对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的促进作用及其机制被引量：20
- 2007年
- 目的研究线粒体融合蛋白基因(mitofusion-2,Mfn2)促进大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的作用及其机制。方法以空载缺陷型腺病毒(Adv-GFP)为对照,以复制缺陷型腺病毒作为载体,将Mfn2转移到rVSMCs中,Western blot法观察感染后Mfn2基因的表达;TUNEL法检测凋亡细胞阳性率;琼脂糖凝胶电泳观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;Western blot等检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-9的含量。结果高表达Mfn2基因促进rVSMCs凋亡,使rVSMCs线粒体Bcl-2蛋白表达减少、Bax增多,胞质Caspases-9被激活。结论Mfn2基因促进rVSMCs的凋亡,其机制与活化线粒体凋亡途径有关。
- 李俐王剑明陈光慧郭小梅
- 关键词：血管平滑肌细胞细胞凋亡线粒体
- 高表达Mfn2基因激活大鼠血管平滑肌细胞线粒体凋亡路径
- 目的研究线粒体融合素基因(mitofusion-2,Mfn2)促进大鼠血管平滑肌细胞(rVSMC)的凋亡作用及线粒体凋亡路径的主要分子靶点。方法以空载缺陷型腺病毒(Adv—GFP)为对照,用携带Mfn2基因的腺病毒 (A...
- 李俐赵丽陈光慧郭小梅
- 文献传递
- tMfn2基因抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与机制被引量：5
- 2009年
- 目的比较线粒体融合素基因2（Mfn2）和去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2（tMfn2）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的作用，探讨tMfn2基因对VSMCs增殖的影响及其相关的信号通路。方法用携带tMfn2基因和Mfn2基因的重组腺病毒（Adv—tMfn2和Adv-Mfn2）感染VSMCs，检测tMfn2蛋白和Mfn2蛋白在细胞中的表达水平；细胞计数法、四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测VSMCs的增殖；流式细胞术检测tMfn2基因对VSMCs周期的影响；Western blot分析各组磷酸化ERK1／2和磷酸化Raf-1蛋白表达水平的变化；采用方差分析对数据进行统计学处理。结果Adv-tMfn2和Adv—Mfn2感染VSMCs后能有效表达出相应蛋白；细胞计数和MTT结果显示，tMfn2和Mfn2均使VSMCs增殖受到明显抑制（P〈0．01），且前者较后者抑制效果更明显（P〈0．01）；流式细胞术结果表明tMfn2和Mfn2使多数VSMCs停滞于G0／G1期，细胞比例为（88．01±4．38）％和（67．43±6．21）％，可见tMfn2基因对细胞周期的影响更明显（P〈0．01）。进一步研究表明tMfn2比Mfn2更能降低磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）和磷酸化Raf-1（p-Raf-1）的表达水平（P〈0．01）。结论与Mfn2基因相比，tMfn2基因更能显著抑制VSMCs增殖，使细胞周期停滞于G0／G1期。这一作用主要通过抑制Ras-Raf-ERK1／2信号通路，下调磷酸化Raf-1蛋白表达，进而抑制ERK1／2的磷酸化而实现。
- 赵丽王四坤周炜廖华张文娟陈光慧郭小梅
- 关键词：细胞增殖腺病毒血管平滑肌细胞
- tMfn2基因诱导血管平滑肌细胞的凋亡(英文)
- 2009年
- 背景:线粒体融合素2蛋白,主要通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B诱导血管平滑肌细胞凋亡。去除穿膜区序列的线粒体融合素2蛋白,相对分子质量减小41%,诱导凋亡作用可能更强。目的:观察比较去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。设计、时间及地点:基因水平的对比观察实验。于2008-01/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心实验室完成。材料:大鼠血管平滑肌细胞及携带半乳糖甘酶基因、携带线粒体融合素2基因和携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒均由陈光慧教授惠赠。方法:将大鼠血管平滑肌细胞传代培养3～10代后随机分为4组,①空白对照组:不加干预。②携带半乳糖甘酶基因的对照组:感染携带半乳糖甘酶基因的重组腺病毒。③携带线粒体融合素2基因的实验组:感染携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒。④携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的实验组:感染携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒。主要观察指标:①重组腺病毒感染血管平滑肌细胞24h后观察完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因的表达情况。②感染后24,48和72h采用流式细胞术、酶联免疫吸附法观察细胞凋亡情况。③免疫印迹分析病毒感染血管平滑肌细胞24h后磷酸化蛋白激酶B表达变化。结果:①感染后完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均有表达。②去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用显著增强,且呈时间依赖性(P<0.01)。③两个实验组中磷酸化蛋白激酶B水平均明显降低,但去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因实验组更显著(P<0.01)。结论:去除穿膜区序列的线粒体融合素基因2诱导血管平滑肌细胞凋�
- 赵丽周炜陈光慧郭小梅
- 关键词：凋亡腺病毒血管平滑肌细胞
